用熒光顯微鏡計(jì)數(shù)微生物菌種培養(yǎng)-細(xì)胞儀

要證明一個候選益生元的性質(zhì)，最好是能反復(fù)地進(jìn)行人類攝食實(shí)驗(yàn)
，并用選擇性培養(yǎng)基的經(jīng)典平板計(jì)數(shù)法來證明。這就需要厭氧取樣，執(zhí)
行絕對嚴(yán)格的厭氧操作，并且對廣泛細(xì)菌屬的典型總好氧菌和總厭氧菌
進(jìn)行培養(yǎng)，例如擬桿菌、雙歧桿菌、梭菌、腸桿菌、真桿菌和乳酸桿菌
。由于培養(yǎng)基不可能做到對所有細(xì)菌都有選擇性，故對個別菌落要用顯
微鏡檢測、細(xì)胞膜三甘油酯組成、典型發(fā)酵模式或16S rRNA技術(shù)來證明
。

更先進(jìn)的新技術(shù)是熒光免疫原位雜交(FISH)法，其中選擇性雜交細(xì)
菌可用熒光顯微鏡計(jì)數(shù)，或用高通量流式細(xì)胞儀來計(jì)數(shù)。

簡單的報(bào)道單一微生物菌種在純培養(yǎng)下或少數(shù)幾個細(xì)菌屬的細(xì)胞數(shù)
在復(fù)雜的混合細(xì)菌(例如糞便)培養(yǎng)條件中的增加，體內(nèi)或體外實(shí)驗(yàn)的結(jié)
果都不能用來證明它具有益生元作用。這是因?yàn)檫@種有限的實(shí)驗(yàn)方法并
不能看作是高度復(fù)雜的腸道菌群，也不能反映其中細(xì)菌的相互作用?，F(xiàn)
在只有兩種食物組成是符合益生元標(biāo)準(zhǔn)要求的，即菊粉型果聚糖(inuli
n-type fructan)和反式低聚半乳糖。再者菊粉和低聚果糖已被認(rèn)為是
典型益生元，因?yàn)槠錉I養(yǎng)作用符合益生元概念的要求。

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