TLC法是將供試品溶液在薄層板上點樣，經(jīng)展開、檢視后得到的色譜圖，與合適的對照物按同法得到的色譜圖對照，用于藥品的鑒別或雜質(zhì)檢查。

　　一、工具和材料。

　　A.薄層板。

　　國產(chǎn)薄層玻璃板材要求平滑，平滑，洗凈無水珠，干燥。主要固定相有硅膠G，硅膠GF254，硅膠H，硅膠HF254，其次是硅藻土，硅藻土G，氧化鋁，氧化鋁G，微晶纖維素F254等。它的粒度，一般要求直徑5~40微米。

　　薄涂層一般分為無粘合劑型和含粘合劑型兩種;前者直接將固定相涂布于玻板上，后者將一定量的粘合劑添加到固定相中，一般常用10%~15%鍛石膏(CaSO4·2H2O,140℃加熱4小時)，混勻后加水適量使用，或以羧甲基纖維素鈉水溶液(0.2%~0.5%)適量調(diào)成糊狀，均勻涂布于玻板上。用涂層器涂覆，可使固定相涂覆在玻板上，形成符合厚度要求的均勻薄層。

　　市場上銷售的薄層板主要有普通薄層板和高效薄層板，如硅膠薄層板，硅膠GF254薄層板，聚酰胺薄膜，鋁基薄層板等。

　　(2)點樣器與紙色譜法相同。

　　(3)展開容器應(yīng)采用適合薄層板尺寸的玻璃薄層色譜法展開筒，其蓋緊、底部平整、光滑或有兩個凹槽。

　　(4)顯色劑，見每一品種的規(guī)定?？捎脟婌F顯色、浸漬顯色或置碘蒸汽顯色等方法檢測斑點。

　　(5)顯色裝置噴霧顯色要求用壓縮氣體使顯色劑呈均勻細(xì)密狀噴射;可用專用玻璃器皿或適當(dāng)?shù)牟ＡЦ状娼n顯色;用雙槽玻璃缸或適當(dāng)大小的干燥器代替蒸氣熏蒸顯色。

　　(6)顯示器為暗盒，裝有可見光、短波紫外線(254nm)、長波紫外線(365nm)光源和相應(yīng)的濾光片，并可附加攝像設(shè)備以拍攝圖像，暗盒內(nèi)的光源應(yīng)具有足夠的亮度。

　　二、運作方法。

　　(1)制備薄層板。

　　除另有規(guī)定者外，自制的薄層板，將1份固定相和3份水在研缽中單向研磨混合，除去表面的氣泡，倒入涂布器中，平滑地移動涂布器進行涂布(厚度為0.2~0.3mm)，取下涂滿薄層的玻板，置水臺上，于室溫下晾干后，在110℃下活化30分鐘，即放置一個裝有干燥劑的干燥盒備用。在使用之前檢查它的均勻性(通過透射光和反射光來檢查)。

　　市場上銷售的薄層板在使用前應(yīng)在110℃激活30分鐘。聚酰胺膜無活性;鋁基薄層板可根據(jù)需要剪斷，但應(yīng)注意剪斷薄層板底邊的硅膠層不得有破損。如果貯藏過程中被空氣中的雜質(zhì)污染，使用前可用合適的溶劑向上展開展開預(yù)洗劑，110℃激活后，用干燥器備用。

　　除另有規(guī)定外，用點樣器在薄層板上進行點樣，一般為圓點，點樣基線距底邊2.0cm，樣點直徑2~4mm，點距距可見斑擴散情況以不影響檢測為宜，一般為1.0~2.0cm。點樣時一定要小心，不要損壞薄層表面。

　　(3)展開展開缸如果需要預(yù)先加滿展開劑，可向缸內(nèi)加足數(shù)量的展開劑，并在壁上貼兩張和展開缸一樣高和寬的濾紙條，一端浸入展開劑，密封頂蓋，使系統(tǒng)平衡或按不同品種進行操作。[醫(yī)教網(wǎng)絡(luò)搜集整理]

　　把點好的樣品的薄層板放入展開器，浸入展開器深度0.5~1.0cm，距薄層板底邊距0.5~1.0cm，不要將樣品浸入展開器內(nèi))，密封頂蓋，待展開至規(guī)定距離(一般10~15cm)后，取出薄層板，晾干，按品種規(guī)定檢驗。

　　展布可單向展開，即單向展開;也可雙向展開，即先向一個方向展開，然后取出，直到展布完全揮發(fā)后，使紙片旋轉(zhuǎn)90°，再用原來的展布或其他的展布;也可多次展開。

　　(4)可用熒光猝滅法顯色和檢測熒光薄層板;可直接檢測普通薄層板，例如有色物質(zhì);可檢測無色物質(zhì)的物理或化學(xué)方法。物理法是檢測出斑點的熒光顏色和強度;化學(xué)方法一般是用化學(xué)試劑顯色后，立即蓋住同樣大小的玻片，進行檢測。

　　三、系統(tǒng)適應(yīng)性測試。

　　根據(jù)每個品種的具體要求，對檢測方法進行系統(tǒng)適用性試驗，檢測斑點的檢測靈敏度、比值變化(Rf)和分離效率應(yīng)符合規(guī)范要求。

　　檢測靈敏度是指雜質(zhì)檢查時，用對照液稀釋幾倍于供試溶液和對照液在規(guī)定的色譜條件下的溶液。

　　其次，在同一薄層板上進行點樣，展開，觀察，前者應(yīng)顯示出明顯的斑點。

　　(2)比移值(Rf)是指從基線到展斑中心的距離與從基線到展斑前沿的距離之比。

　　可以通過計算出供試品溶液中主斑點和對照品溶液中主斑點的比移值來比較，也可以通過比移值來確定主斑點和雜質(zhì)斑點的位置。

　　(3)分離效果鑒別時，對照品與結(jié)構(gòu)類似的藥物對照品配制的混合對照溶液應(yīng)出現(xiàn)明顯的分離斑。雜對照品檢驗時，雜對照品用供試品本身稀釋的對照液或同品種對照品溶液溶解制成的混合對照液應(yīng)有兩個明顯的雜對照液斑點，或被檢驗成分與相鄰的雜對照品斑點明顯分離。[醫(yī)教網(wǎng)絡(luò)搜集整理]

　　四、鑒定方法。

　　(1)鑒別可采用點樣、展開和在同一片薄片上檢測到的與同一濃度的對照品溶液，供品溶液所顯出的主色斑的顏色(或熒光)和位置(Rf)應(yīng)與對照品溶液的主色斑一致，且主色斑的大小和顏色的深度應(yīng)大致相同。或者用供試品溶液與對照品溶液等體積混合物，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)收集整理應(yīng)顯示單一、緊密的斑點;或者選擇與供試品溶液中化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的藥物對照品與供試品溶液中的主要斑點比較，兩者的Rf應(yīng)不同;或者用上述兩種溶液中的體積混合物顯示兩種清楚分離的斑點。

　　雜質(zhì)檢查可采用雜質(zhì)對光方法，供品溶液自身稀釋對照法，或雜質(zhì)對光方法與供品溶液自身稀釋對照法。除主要斑點外，供試品溶液中的其它斑點應(yīng)與相應(yīng)對照品溶液或系列對照品溶液中的主要斑點進行比較，或與供試品溶液自身稀釋對照溶液或系列自身稀釋對照溶液中的主要斑點進行比較，不可進一步加深。

　　一般應(yīng)該規(guī)定雜質(zhì)的斑點數(shù)和單雜質(zhì)量，并且在使用系列本身的稀釋對照溶液時，還可以規(guī)定估計的總雜質(zhì)。