? 近期， 歐洲毒雞蛋事件備受關(guān)注。據(jù)報(bào)道，雞蛋被污染的情況主要發(fā)生在歐洲，源于比利時(shí)、法國、德國和荷蘭等四國的農(nóng)場，受到污染的雞蛋已經(jīng)波及奧地利、英國、丹麥、愛爾蘭等國?？瓷先ゾ嚯x遙遠(yuǎn)，但是香港地區(qū)也進(jìn)口了歐洲受到污染的雞蛋。

這批雞蛋主要的問題在于殺蟲劑氟蟲腈超標(biāo)。氟蟲腈是一種廣譜殺蟲劑，曾作為代替高毒有機(jī)磷農(nóng)藥的首選品種。但是，由于其在作物中半衰期長、對環(huán)境不友好、殘留物在生物體內(nèi)富集等毒副作用，世界衛(wèi)生組織將它列為“對人類有中度毒性”的化學(xué)品，已被多國禁止使用。

除氟蟲腈外，在正常使用下其代謝產(chǎn)物主要有MB45950（氟蟲腈硫醚）、MB46136（氟蟲腈砜）、MB46513（氟甲腈），都具有一定毒性，有的毒性甚至高于母體，也需要高度關(guān)注。

賽默飛方案

? 對于氟蟲腈及其代謝物的分析，無論是采用基于OrbitrapTM技術(shù)的高分辨質(zhì)譜還是三重四極桿質(zhì)譜檢測，賽默飛都有成熟的方法可供用戶直接使用。在歐洲毒雞蛋事件爆發(fā)前，我們的應(yīng)用工程師就已和用戶合作發(fā)表了針對氟蟲腈及其代謝物分析的文章。該方法利用TurboflowTM在線凈化技術(shù)與液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)聯(lián)用測定氟蟲腈及其代謝產(chǎn)物在蔬菜中的殘留。

? TurboflowTM（渦流色譜技術(shù)）是一種針對復(fù)雜基質(zhì)樣品的在線凈化技術(shù)，該技術(shù)結(jié)合了體積排阻和反相保留原理，在捕獲目標(biāo)化合物的同時(shí)能夠快速凈化基質(zhì)樣品。

? 賽默飛基于TurboflowTM技術(shù)的Transcend系統(tǒng)可以幫助用戶進(jìn)行全自動化的樣品前處理，同時(shí)具備良好的凈化效果。通過Transcend系統(tǒng)和TSQ三重四極桿質(zhì)譜儀的聯(lián)用，可以在保證高通量，高靈敏度、高準(zhǔn)確度的基礎(chǔ)上，幫助用戶實(shí)現(xiàn) Start To Finish 的輕松簡易的工作流程。

實(shí)驗(yàn)方法

樣品制備和提取

? 樣品取可食部分，粉碎勻漿。準(zhǔn)確稱取樣品5.0 g，置于50 mL塑料離心管中，加入10mL乙腈，于渦旋混合器上渦旋1min，6000r/min離心5min，取1mL上清液過0.22 μm濾膜，上機(jī)測定。

在線凈化條件

在線凈化柱：Cyclone-P (0.5×50 mm)；上樣溶劑（A）：5 mmol/L乙酸銨水溶液；洗脫溶劑（B）：甲醇；清洗溶劑（C）：異丙醇/乙腈/丙酮（1/1/1,v/v/v）,洗脫流速：2.0 mL/min，進(jìn)樣體積：50 μL。

分析柱：Hypersil GOLD（100×2.0 mm，1.9 μm），流動相A相：5 mmol/L乙酸銨水溶液，流動相B相：乙腈。在線凈化程序見表1。

表1 ?Turboflow在線凈化和梯度洗脫程序

步驟

秒數(shù)

s

上樣泵

洗脫泵

目的

流速

mL/min

A??? %

B?

?%

C

%

目的

轉(zhuǎn)變? 模式

流速

mL/min

A

%

B

%

1

60

上樣

2.0

100

-

-

平衡

Step

0.4

95

5

2

60

轉(zhuǎn)移

0.06

100

-

-

轉(zhuǎn)移

Step

0.4

95

5

3

120

淋洗

2.0

-

-

100

洗脫

Ramp

0.4

65

35

4

180

淋洗

2.0

-

-

100

洗脫

Ramp

0.4

5

95

5

120

淋洗

2.0

-

100

-

洗脫

Step

0.4

5

95

6

60

充滿洗脫環(huán)

2.0

20

80

-

洗脫

Step

0.4

95

5

7

120

條件化

2.0

100

-

-

平衡

Step

0.4

95

5

?

?

質(zhì)譜條件

電噴霧離子源（ESI），負(fù)離子掃描，電噴霧電壓：-2500 V，離子源溫度：400℃，鞘氣壓力：40 arb，輔助氣壓力：15 arb，源內(nèi)誘導(dǎo)解離電壓：10 V，毛細(xì)管溫度：350℃，Q1，Q3單位分辨率：0.7 Da；選擇反應(yīng)監(jiān)測（SRM）工作模式，SRM優(yōu)化參數(shù)列表見下表。

????? 表2 質(zhì)譜參數(shù)

化合物

離子對

碰撞能量/(E/eV)

透鏡電壓/V

氟蟲腈

434.9/250.0

27

177

434.9/330.0*

17

177

氟甲腈

386.9/282.1

31

53

386.9/351.1*

15

53

氟蟲腈硫醚

418.9/262.0*

28

104

418.9/383.0

15

104

氟蟲腈砜

450.9/281.9

30

100

450.9/414.9*

16

100

注：*為定量離子

?

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)在1-50 ng/mL濃度范圍內(nèi)各組分均呈良好的線性。以目標(biāo)物在空白樣品中3倍信噪比計(jì)算檢出限，氟蟲腈0.5 μg/kg、氟蟲腈硫醚0.1 μg/kg、氟蟲腈砜0.1 μg/kg、氟甲腈0.1 μg/kg。實(shí)驗(yàn)回收率在84.8%-97.2%之間，空白樣品及添加樣品中氟蟲腈及其代謝物的SRM數(shù)據(jù)見下圖。

圖1? 空白樣品SRM色譜圖

?圖2? 添加50.0 μg/kg樣品MRM色譜圖

?
a 氟甲腈， b 氟蟲腈硫醚， c 氟蟲腈， d 氟蟲腈砜

實(shí)驗(yàn)建立了在線凈化/液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)測定蔬菜中氟蟲腈及其代謝物的方法。本方法采用先進(jìn)的TurboflowTM在線凈化技術(shù)，前處理簡單，試劑用量減少，可快速全自動處理分析樣品，并且可以降低基質(zhì)干擾的影響。該方法靈敏度高，回收率穩(wěn)定，重現(xiàn)性良好，可用于雞蛋中氟蟲腈及其代謝物的日常檢測。