一般動物血管等超微結(jié)構(gòu)常用灌注固定-生物顯微鏡

要想獲得良好的精確的酶活性定位，理論上必須充分考慮每一種影
響因素，但實際上很難做到，一般盡可能地選擇最佳反應(yīng)條件和最佳操
作步驟。

  取材和固定
固定能明顯影響酶活性，但固定使細胞膜的通透性發(fā)生改變，有利
于底物和捕捉劑的滲透，也有利于形態(tài)結(jié)構(gòu)的保存。固定方法按樣品來
源確定。酶對任何一種固定液都是敏感的，如果因固定而很快喪失活性
(如琥珀酸脫氫酶)，那么只能用不固定的標本。但不固定標本酶活性過
高時，會出現(xiàn)反應(yīng)產(chǎn)物過剩，或者由于酶往往是水溶性的，容易產(chǎn)生酶
本身的擴散移位，使酶活性不正確地分布。所以一般均用固定標本進行
酶細胞化學(xué)研究。固定的程度按酶的耐受性確定，對于那些耐受固定的
酶也不能過度固定，一般固定程序是，在切片的孵育時間為15—30min
左右時，尚能檢出酶的活性為宜。

一般實驗動物常用灌注固定，手術(shù)標本等用浸泡固定，其中血管或
心臟灌注固定的效果要比浸泡固定好。浸泡固定的主要缺點是固定劑穿
透慢，會導(dǎo)致組織深部固定不好，而且固定時間較長會使酶活性喪失。
血管或心臟灌注固定速度快，固定均勻，固定時間易控制，因此在保存
酶活性和保存超微結(jié)構(gòu)兩方面部比浸泡固定優(yōu)越。但對于無法用灌注固
定的標本(如手術(shù)標本)則用浸泡固定。在進行大批功能性動物實驗時，
幾組動物需控制相同的酶反應(yīng)條件，灌注固定操作時間較長，無法做到
使幾組實驗動物同時取材、同時固定，并保證固定條件基本一致，這時
一般只能用浸泡固定。

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