農(nóng)桿菌質(zhì)粒載體系統(tǒng):
質(zhì)粒載體系統(tǒng)中zui常用的質(zhì)粒有:Ti質(zhì)粒和Ri質(zhì)粒。Ti質(zhì)粒存在于根癌農(nóng)桿菌中,Ri質(zhì)粒存在于發(fā)根農(nóng)桿菌中。Ti質(zhì)粒和Ri質(zhì)粒在結(jié)構(gòu)和功能上有許多相似之處,具有基本一致的特性。
但實際工作中,絕大部分采用Ti質(zhì)粒。農(nóng)桿菌質(zhì)粒是一種能實現(xiàn)DNA轉(zhuǎn)移和整合的天然系統(tǒng)。
Ti質(zhì)粒有兩個區(qū)域:T-DNA區(qū)(是質(zhì)粒上能夠轉(zhuǎn)移整合入植物受體基因組并能在植物細(xì)胞中表達(dá)從而導(dǎo)致冠癭瘤的發(fā)生,且可通過減數(shù)分裂傳遞給子代的區(qū)域)和Vir區(qū)(編碼能夠?qū)崿F(xiàn)T-DNA轉(zhuǎn)移的蛋白)。
T-DNA長度為12-24kb 之間,兩端各有一個含25 hp 重復(fù)序列的邊界序列,在整合過程中左右邊界序列之間的T-DNA可以轉(zhuǎn)移并整合到宿主細(xì)胞基因組中,研究發(fā)現(xiàn)只有邊界序列對DNA的轉(zhuǎn)移是必需的,而邊界序列之間的T-DNA并不參與轉(zhuǎn)化過程,因而可以用外源基因?qū)⑵涮鎿Q。
Vir區(qū)位于T-DNA以外的一個35 kb 內(nèi),其產(chǎn)物對T-DNA的轉(zhuǎn)移及整合必不可少。
農(nóng)桿菌侵染植物首先是吸附于植物表面?zhèn)?,受傷植物分泌的酚類小分子化合物可以誘導(dǎo)Vir基因的表達(dá)。Vir產(chǎn)物能誘導(dǎo)Ti質(zhì)粒產(chǎn)生一條新的T-DNA單鏈分子。此單鏈分子從Ti質(zhì)粒上脫離后,可以與Vir產(chǎn)物VIRD 2 蛋白共價結(jié)合,并在VIRD 4和VIRB等蛋白的幫助下從農(nóng)桿菌進(jìn)入植物細(xì)胞的染色體中。
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