上海遠慕生物代理銷售Omega質粒中量提取試劑盒Plasmid Midi Kit(2)，快速過濾超大量質粒提取試劑盒，96孔板Swift質粒提取試劑盒，超快速96孔質粒小量提取試劑盒，無內(nèi)毒素中/大量提取試劑盒，BAC/PAC 大型質粒小提/大提試劑盒，磁珠無內(nèi)毒素小量提取試劑盒，瓊脂糖凝膠回收試劑盒，聚丙烯酰胺凝膠RNA純化試劑盒，PCR純化試劑盒，其他系列等，供應進口/國產(chǎn)ELISA試劑盒，質粒提取試劑盒，質粒載體，動物血清血漿，生物分子，微生物，抗原，抗體，培養(yǎng)基，染色液，緩沖液，化學試劑，生化試劑，通用試劑，環(huán)保試劑，其他實驗試劑等，了解更多產(chǎn)品詳情請來電！

名稱：質粒中量提取試劑盒

品牌：Omega

供應商：上海遠慕

型號：Plasmid Midi Kit(2)

用途：從小于15ml培養(yǎng)過夜的菌液提取50-70ug高純度質粒DNA

質粒中量提取試劑盒Plasmid Midi Kit(2)操作步驟：

提示：將RNase A全部加入溶液P1中，混勻，使用后置于2-8℃保存。

1.取過夜培養(yǎng)菌40-60ml（最大不超過90 ml）菌液，裝入50ml離心管中，4,500~6,000 x g于4℃離心5 min沉淀菌體（也可12,000 x g離心2分鐘），完全棄除上清。 

2.加入2.5 ml 溶液P1，充分混懸震蕩菌體沉淀，使其完全分散開，至無絮塊存在。室溫放置3~5 min。如果有未徹底混勻的菌塊，會影響裂解，導致提取量和純度偏低。

3.加入2.5 ml 溶液P2，輕輕顛倒離心管6~8次，室溫放置5 min，使細菌完全裂解，溶液透明。 溫和地混合，不要劇烈震蕩，以免基因組DNA剪切斷裂！所用時不應超過5分鐘！以免質粒受到破壞。此時菌液應變得清亮粘稠，如果菌體少，很快清亮粘稠后就可以做下一步，不是一定要準確的5分鐘。如果未變得清亮，可能由于菌體過多，裂解不徹底，應減少菌體量。

4.加2.5 ml溶液PⅢ，立即顛倒離心管6~8次，充分混勻，至白色絮狀物產(chǎn)生。上述裂解液于4℃ 12,000~16,000 x g離心10~15 min，小心吸出上清，移入新的50 ml離心管中。加入溶液PⅢ后應該立即混勻，以免產(chǎn)生SDS的局部沉淀。  

注意： 使用異丙醇沉淀，蛋白雜質和鹽離子共沉淀較少，可能看不到明顯的較大團塊沉淀，但是質粒還是可以完全沉淀下來，不影響實際的質粒產(chǎn)量。如果你習慣看見較大的沉淀團塊操作，可以選擇2倍體積的無水乙醇沉淀。

5.加入5 ml 異丙醇，顛倒離心管，充分混勻。

6.于4℃ 12,000~16,000 x g離心10 min，小心棄去上清，倒置于吸水紙上輕輕瀝干殘余液體，加入3-5ml 70%乙醇漂洗一遍，最高速離心5分鐘，棄上清，晾干沉淀。

質粒中量提取試劑盒Plasmid Midi Kit(2)注意事項：

1.提取的質粒量與細菌培養(yǎng)濃度、質粒拷貝數(shù)等因素有關。如果所提質粒為低拷貝質?；虼笥?0kb 的大質粒，應加大菌體使用量，同時按比例增加P1、P2、PⅢ的用量。

2.提取大質粒時操作動作要輕柔，應該使用剪大了開口的吸頭，防止機械剪切對DNA的損壞。

3.DNA沉淀液沉淀離心后，可能看不到明顯沉淀。如未見沉淀，擔心DNA丟失，可保留上清液，待完成全部操作后電泳鑒定，以確定是否獲得終產(chǎn)物（數(shù)百微克DNA離心沉淀在管的側壁上，可能無法看到明顯團塊）。 

4.得到的質粒DNA可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。OD260值為1相當于大約50μg/ml DNA。電泳可能為單一條帶，也可能為2條或者多條DNA條帶，這主要是不同程度的超螺旋構象質粒泳動位置不一造成，與提取物培養(yǎng)時間長短、提取時操作劇烈程度等有關。

5.質粒DNA確切分子大小， 必須酶切線性化后，對比DNA分子量Marker才可以知道。處于環(huán)狀或者超螺旋狀態(tài)的質粒，泳動位置不確定，無法通過電泳知道確切大小。

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