以下介紹一種最常用的方法:
堿裂解法:此方法適用于小量質(zhì)粒DNA的提取,提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、PCR擴增、銀染序列分析。方法如下:
1、接1%含質(zhì)粒的大腸桿菌細(xì)胞于2ml LB培養(yǎng)基。
2、37℃振蕩培養(yǎng)過夜。
3、取1.5ml菌體于Ep管,以4000rpm離心3min,棄上清液。
4、加0.lml溶液I(1%葡萄糖,50mM/L EDTA pH8.0,25mM/L Tris-HCl pH8.0)充分混合。
5、加入0.2ml溶液 II(0.2 mM/L NaOH,1% SDS),輕輕翻轉(zhuǎn)混勻,置于冰浴5 min 。
6、加入0.15m1預(yù)冷溶液III(5 mol/L KAc,pH4.8),輕輕翻轉(zhuǎn)混勻,置于冰浴5 min 。
7、以10,000rpm離心20min,取上清液于另一新Ep管