細(xì)胞色氨酸羥化酶 （Tryptophan Hydroxylase）活性比色法定量檢測試劑盒

產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

 細(xì)胞色氨酸羥化酶 （Tryptophan Hydroxylase）活性比色法定量檢測試劑是一種旨在通過底物色氨酸和四氫生物蝶呤在色氨酸羥化酶的催化下，產(chǎn)生5-羥色胺酸，進而使用福林酚試劑與之反應(yīng)，生成藍(lán)色產(chǎn)物，呈現(xiàn)吸光峰值的增高，即采用比色法來測定細(xì)胞裂解萃取樣品中酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取懸液樣品（動物、人體、昆蟲等）色氨酸羥化酶的總活性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

色氨酸羥化酶 （Tryptophan Hydroxylase；TPH；EC1.14.16.4），又稱為色氨酸單加氧酶（Tryptophan 5-monooxygenase）是芳香族氨基酸羥化酶家屬中的成員，通過將羥基基團加在色氨酸的5 位上，產(chǎn)生5-羥色胺酸（5-hydroxytryptophan；5-HTP），成為神經(jīng)傳遞介質(zhì)5-羥色胺（serotonin）的前體。色氨酸羥化酶分為2個亞型：TPH1和TPH2。前者在外周末梢和中樞神經(jīng)系統(tǒng)高度表達，例如皮膚、內(nèi)臟、松果體，后者只在神經(jīng)元上高度表達。其活性異常將導(dǎo)致與5-羥色胺生成信號通路（serotonergic pathway）有關(guān)的精神疾病，包括抑郁、精神分裂、強迫癥、*行為等的病理演變?；诘孜锷彼岷退臍渖锏剩╰etrahydrobiopterin）在色氨酸羥化酶的催化下，產(chǎn)生5-羥色胺酸和二氫生物蝶呤（dihydrobiopterin），進而使用福林-喬卡爾泰烏酚試劑 （Folin -Ciocalteu phenol reagent），在堿性條件下，與5-羥色氨酸反應(yīng)，生成藍(lán)色產(chǎn)物，在分光光度儀下（736nm波長）檢測，來定量分析色氨酸羥化酶的總活性。其反應(yīng)系統(tǒng)為：

產(chǎn)品內(nèi)容

 清理液（Reagent A） 毫升

 裂解液（Reagent B） 毫升

 緩沖液（Reagent C） 毫升

 反應(yīng)液（Reagent D） 微升

 顯色液（Reagent E）   毫升

 強化液（Reagent F）   毫升

 陰性液（Reagent G）   毫升

產(chǎn)品說明書   1份

保存方式

保存 裂解液（Reagent B）、 緩沖液（Reagent C）和 反應(yīng)液（Reagent D）在－20℃冰箱里； 其余的保存在4℃冰箱里； 顯色液（Reagent E）避免光照；有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于樣品制備和保存的容器

15毫升錐形離心管：用于樣品制備的容器

細(xì)胞刮脫棒：用于脫離細(xì)胞

DOUNCE勻漿器：用于裂解細(xì)胞

（微型）臺式離心機：用于樣品制備

比色皿：用于比色的容器

分光光度儀：用于比色分析

實驗步驟

實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的 裂解液（Reagent B）置入冰槽里融化。然后進行下列操作。