ODC蛋白;鳥氨酸脫羧酶(ODC)重組蛋白
英文名稱:Recombinant Ornithine Decarboxylase (ODC)
ODC1
來源:原核表達
宿主:E.coli
規(guī)格:10μg 50μg 200μg 1mg 5mg
內(nèi)毒素水平: 1.0EU/μg(LAL法測定)具體詳見說明書
片段與標(biāo)簽:Ile234~Ala453 (Accession # P11926) with N-terminal His Tag
物種來源(人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、獼猴、山羊、綿羊、馬、牛、豬、雞、狗等其他物種多物種)相同的名稱,不同的物種。
性狀:凍干粉
表達系統(tǒng): 大腸桿菌
產(chǎn)品純度: 95%-98%(SDS-PAGE RP-HPLC)
保存條件:如果樣品在2-4周內(nèi)使用,可以在4°C低溫儲存。
ODC蛋白;鳥氨酸脫羧酶(ODC)重組蛋白長期儲存,建議添加載體蛋白(0.1%HSA或BSA),并儲存在-20~ -80°C。避免多次凍融。
影響蛋白原核表達的因素很多,如蛋白的親水性、密碼子的稀有性、蛋白毒性等。如疏水性過強,就難以表達;稀有密碼子過多或多個稀有密碼子連在一起也難以表達。我以前也遇到過這種情況,首先要分析你的蛋白序列和二級結(jié)構(gòu),看看是否存在這些影響因素。如果必須要表達全長蛋白,像你這種情況難度就比較大,可以進行密碼子的改造,或者更換載體,或者更換宿主菌??茨阍囼灥哪康?,如果不需要表達全長蛋白,如表達部分抗原性強的片段,可以簡單一點,表達部分片段即可。
ODC蛋白;鳥氨酸脫羧酶(ODC)重組蛋白原核表達秘笈:表達前的分析比什么都重要:
表達不同于其它一些實驗,比如:提取質(zhì)粒、PCR、電鏡切片,這些人為控制的因素比較多,出問題相對來說也比較好分析。表達呢,你把質(zhì)??寺『美?,交給細(xì)胞,然后有些事情就不全是你要怎樣就怎樣了。原核表達在表達當(dāng)中來說還是比較簡單,細(xì)菌培養(yǎng)條件簡單、生長速度快,需要的儀器和培養(yǎng)基都比較便宜。當(dāng)然,它也存在一些缺乏高級修飾、細(xì)胞內(nèi)部還原性過高等缺點。
原核表達從一開始的設(shè)計就非常重要,所謂好的開始是成功的一半。做足準(zhǔn)備功夫,可是省去很多將來后悔的事情。首先,我們要根據(jù)是否要求可溶將載體分成兩大類,如果希望可以同時嘗試多種表達系統(tǒng),也有許多商業(yè)化的系統(tǒng)供選擇。
前面已經(jīng)介紹過許多公司的商業(yè)化載體、菌株和多系統(tǒng)表達體系,現(xiàn)在我想先從自己的蛋白分析講起。同樣的載體、同樣的系統(tǒng),很可能表達這個蛋白表達量奇高,但是另外一個就是做不出來,所以沒有全能的載體,只有永恒的分析。當(dāng)然如果你的蛋白曾經(jīng)在原核系統(tǒng)中成功表達出來那是好的,ODC蛋白;鳥氨酸脫羧酶(ODC)重組蛋白選擇同樣的載體表達成功率會高很多。如果沒有也好嘗試找一些曾經(jīng)表達過和你的蛋白擁有相類似結(jié)構(gòu)的文獻。比如大部分含有哺乳動物src同源的SH2蛋白相互作用域的蛋白都是用pGEX系列載體表達出來的。根據(jù)經(jīng)驗而言,含有較少半胱氨酸和脯氨酸的、平均大小為60kD的單體蛋白較容易表達。