氨基酸的分離和分析鑒定

  蛋白質(zhì)中氨基酸種類很多，為了研究蛋白質(zhì)的組成和結(jié)構(gòu)，以
及制備和鑒定的需要，必須進(jìn)行氨基酸的分離和分析鑒定工作。常
用的方法很多，其中紙上層析和薄層層析法常用于氨基酸的分析鑒
定方面，離子交換法常用于氨基酸的分離制備和定量測定方面。此
外也常應(yīng)用等電點(diǎn)、溶解度以及與專一試劑作用等方法來分離制備
某些氨基酸。在分析鑒定上還有微生物法、酶化學(xué)法以及根據(jù)某些
氨基酸的特殊基團(tuán)的顯色反應(yīng)等。本節(jié)重點(diǎn)介紹紙上層析法和離子
交換法。

  紙上層析法
  紙上層析是分離鑒定微量氨基酸最簡易有效的方法，一張濾紙，
幾十毫升溶劑，就可把僅有幾個微克的混合氨基酸分開，并加以鑒
定，既可作微量分離，又可作定性分析和定量測定。此法不僅應(yīng)用
于氨基酸，也廣泛用在糖、核苷酸、有機(jī)酸、抗菌素等的分離鑒定
上。
  具體操作時，先將樣品點(diǎn)在濾紙一端距紙邊約2～3厘米處，然
后將點(diǎn)有樣品的一端浸入某一有機(jī)溶劑系統(tǒng)中，經(jīng)毛細(xì)管作用使溶
劑從紙的一端流向另一端，樣品中的混合物也得以分離，濾紙干后
再以適當(dāng)顯色劑或在紫外燈下觀察所得的層析圖譜，加以鑒定
  紙上層析一般屬于分配層桁，它白g基本原理主要是根據(jù)被分
析的樣品在二種不相混合的溶劑系統(tǒng)中的分配系數(shù)(即在二相中濃
度比值)不同而達(dá)薊分離的目的，相當(dāng)于一個連續(xù)的反向液液抽提
過程。紙上層析就是根據(jù)這原理，把一種溶劑固定在固體的支撐物
上，稱固定相，由于濾紙纖維對水有較強(qiáng)的親和力，一般能吸著22
％左右的水分，因此濾紙就是含有，固定相水的惰性支撐物，另一
飽和了水的有機(jī)溶劑相(如飽和酚水、正丁醇一乙酸一水)為流動相
，當(dāng)流動相從含有氨基酸樣品的濾紙上流過時，各種氨基酸就在這
固定相和流動相之間連續(xù)不斷的抽提分配，根據(jù)各種氨基酸在這三
相中的分配系數(shù)不同，在紙上移動的速率也不同，當(dāng)流動的溶劑移
動到一定的前沿后，各種氨基酸就分別集中在濾紙的不同部位而被
分開。

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