激光細胞技術能提高樣品檢測效率-疫熒光檢測

  人們還評價了采用激光掃描細胞技術，結合微分干涉對比(DIC
)確認的免疫熒光檢測技術的應用，并與隱孢子蟲卵囊人工顯微鏡
計數(shù)結果進行了比較。在30～230個的添加水平下卵囊的回收率達
到了50％。與傳統(tǒng)顯微鏡觀察相比，激光掃描細胞技術能提高樣品
處理量，避免操作人員主觀性和觀察疲勞。
  盡管這些方法可以對環(huán)境水樣進行分析，但還沒有確證它們能
否在食品基質中應用?？赡苌婕凹纳x傳播的果蔬與食品是多種多
樣的，這樣僅用一種方法很難實現(xiàn)寄生蟲的分離。分子診斷檢測技
術也是很復雜的一種方法，因為食品中抑制劑的存在會掩蓋其中的
寄生蟲。
  還可以開發(fā)免疫檢測方法來對水樣中的隱孢子蟲進行鑒定。有
一種間接免疫熒光檢測方法對食品基質中隱孢子蟲的檢測非常有用
舊L“一。
  適用于隱孢子蟲的絕大多數(shù)純化技術也適用于環(huán)孢子蟲的純化
(Ortega，私人通信)。隱孢子蟲所用的蔗糖和氯化銫梯度離心也可
用于環(huán)孢子蟲。業(yè)已證明，水過濾系統(tǒng)也能濃縮水源水樣中的環(huán)孢
子蟲。到目前為止，環(huán)孢子蟲的單克隆抗體還沒能制備出來。不僅
僅是因為卵囊有限，還因為卵囊細胞壁的抗原特性很弱。用包被了
凝集素WGA的磁珠來進行處理已證明是一種很有用的方法。
  人們已采用了各種不同的臨床檢測方法來用于環(huán)孢子蟲的鑒定
。對環(huán)境樣品進行檢測時，自身背景熒光被證明是很有用的，盡管
這種檢測方法不具有專一性。最初用于臨床樣品分析的PCR法也適
用于食品基質；但是，其他艾美耳球蟲也可得到與環(huán)孢子蟲相同的
擴增產(chǎn)物?？刹捎肕nll酶的限制性片段長度多態(tài)性來區(qū)分環(huán)孢子蟲
和艾美耳球蟲。利用PCR技術對環(huán)孢子蟲進行分析的最大挑戰(zhàn)是如
何從很少數(shù)量的卵囊中提取需要的DNA，以及如何控制出現(xiàn)的PCR抑
制劑。已經(jīng)開展了各種各樣的研究方法，包括基質螯合、反復凍融
處理、FI'A膜與DNA提取試劑盒等o。研究者還利用不涉及抽提的基
于過濾的實驗方案來制備PCR所需要的DNA模板

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