點亮您的印跡膜，一觸即發(fā)！

關(guān)鍵詞：ECL；Western blotting；HRP底物；化學(xué)發(fā)光

1. 產(chǎn)品概述

ECL試劑，即化學(xué)發(fā)光法檢測辣根過氧化物酶（HRP）的底物，是目前Western blotting檢測中zui為靈敏的試劑。目前市場上普通ECL試劑在使用過程中經(jīng)常出現(xiàn)易淬滅、高背景、不穩(wěn)定以及低豐度蛋白難以檢測等問題，影響zui終實驗結(jié)果。

翊圣生物根據(jù)目前市場現(xiàn)狀，集中免疫檢測領(lǐng)域的科研人員，在嚴(yán)格控制魯米諾原料的基礎(chǔ)上，不斷改良增強劑和穩(wěn)定劑配方，針對不同需求開發(fā)了4類ECL試劑，包含增強型、超敏型、持久型和zui高靈敏度型產(chǎn)品，不僅可滿足實驗者對目的蛋白從低豐度到高豐度表達(dá)的檢測要求，同時可在不影響實驗的條件下，提高發(fā)光強度，使您獲得的圖像更加清晰。

的靈敏度 皮克至低飛克級的抗原檢測

更高的信噪比 發(fā)光底物，降低背景

更利節(jié)省抗體 優(yōu)化底物系統(tǒng)，更高抗體結(jié)合力

優(yōu)異的性價比 更高的性能，更低的價格

的穩(wěn)定性 新型氧化劑，常溫下穩(wěn)定保存1年

2. 產(chǎn)品原理

ECL試劑檢測的核心原理為氧化反應(yīng)發(fā)光：魯米諾（lumino）作為發(fā)光底物的主要成分，在堿性條件下，通過辣根過氧化酶（HRP）催化，被H2O2氧化生成3-氨基鄰苯二酸的激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)其回到基態(tài)時發(fā)出光子，zui大發(fā)射波長為425 nm，光子信號可通過X射線膠片或CCD成像儀被捕獲。

3. 產(chǎn)品選擇

翊圣目前擁有的4種ECL產(chǎn)品，各具特色，能夠完全滿足用戶的免疫印跡應(yīng)用需求。

那么，您的實驗應(yīng)該選擇哪一種產(chǎn)品呢？

表1 ECL試劑選擇指南

Yeasen

Enhanced ECL

增強型

Super ECL

超敏型

SuperDura

持久型

MaxiSignal

zui高靈敏度型

適用樣本

靶點豐度較高，常規(guī)蛋白樣本

靶點豐度低，樣本有限

靶點豐度較低，樣本有限

靶點豐度極低，樣品珍貴

檢測靈敏度

中等皮克級

低皮克級

中等飛克級

低飛克級

信號持續(xù)時間

2 h

12 h

24 h

8 h

適用檢測系統(tǒng)

所有試劑均適用X射線膠片，CCD成像儀

一抗稀釋濃度

1:1000-1:4000

1:1000-1:10,000

1:1000-1:50,000

1:5000-1:100,000

二抗稀釋濃度

1:1000-1:4000

1:2000-1:10,000

1:50,000-1:250,000

1:100,000-1:500,000

推薦用膜

NC膜

NC膜或PVDF膜

NC膜或PVDF膜

NC膜或PVDF膜

存儲穩(wěn)定性

室溫1年

室溫1年

室溫1年

4℃ 1年，室溫半年

優(yōu)勢

同一級別靈敏度中信號zui強

性價比zui高，適用于多數(shù)WB實驗

zui長信號持續(xù)時間，極其適用于多次曝光

靈敏度，極其適用于痕量蛋白檢測

【注】：推薦抗體稀釋濃度為抗體儲液濃度為1 mg/mL時的稀釋濃度。

4. 產(chǎn)品應(yīng)用

Yeasen ECL試劑對比其他品牌同級別產(chǎn)品具有更佳的使用效果。

圖1 Yeasen ECL超敏型底物Super與其他品牌同級別底物Pico檢測效果比對

圖2 Yeasen ECLzui高靈敏度型底物MaxiSignal與其他品牌同級別底物West Femto檢測效果比對

圖3 Yeasen ECL持久型底物SuperDura與其他品牌同級別底物West Dura檢測效果比對

5. 價格優(yōu)勢

Yeasen致力于為您提供性價比zui高的產(chǎn)品。

圖4 Yeasen ECL產(chǎn)品與其他品牌同級別產(chǎn)品價格比對

6. 常見問題

遇到的問題

原因分析

推薦解決方法

膠片出現(xiàn)反影

反應(yīng)系統(tǒng)中HRP量過多

稀釋HRP標(biāo)記物

膠片出現(xiàn)棕色或黃色條帶

熒光猝滅

操作時間過長，膜逐漸干掉

避免膜干掉

保鮮膜、顯影液或定影液污染

養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣

反應(yīng)系統(tǒng)中HRP量過少

增加HRP標(biāo)記物

膠片無條帶顯現(xiàn)或者信號較弱

轉(zhuǎn)膜的效率低

提高轉(zhuǎn)膜效率，用預(yù)染Marker判斷。

抗原、抗體量少或不匹配

增加抗原/抗體量或選擇合適抗原/抗體

X光膠片有問題

曝光后X光譜全黑（而非透明色），則表明膠片已完全曝光，使用新的X光片

顯影/定影液有問題

可預(yù)先曝光一張膠片進(jìn)行判斷，如有問題當(dāng)換用新的顯影/定影液

反應(yīng)系統(tǒng)中HRP量過多

稀釋HRP標(biāo)記物

高背景

一抗二抗?jié)舛忍?/p>

降低抗體濃度，延長封閉時間

抗體未清洗干凈

增加洗膜次數(shù)

封閉不完全

優(yōu)化封閉條件

使用錯誤的封閉劑

使用其他的封閉劑

過度曝光

降低曝光時間

抗體特異性差

更換抗體

反應(yīng)系統(tǒng)中HRP量過多

稀釋HRP標(biāo)記物

條帶有空斑

抗原以及二抗的濃度過高

稀釋樣品重新跑膠，也可將混合好的顯色液冰浴后，加到膜上即刻快速顯色。

帶型不規(guī)則

轉(zhuǎn)膜有氣泡或甲醇（對于PVDF膜）水化不均勻

優(yōu)化轉(zhuǎn)膜條件。

膠片出現(xiàn)斑點

HRP標(biāo)記物聚集體

0.2 m膜過濾HRP標(biāo)記物

非特異性條帶

反應(yīng)系統(tǒng)中HRP量過多

稀釋HRP標(biāo)記物

SDS引起蛋白非特異性結(jié)合

實驗流程中不使用SDS

抗體特異性差

更換抗體

封閉不足

增加封閉時間或使用其他封閉劑

7. 訂購信息

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

價格

Super ECL Detection Reagent

化學(xué)發(fā)光超敏顯色試劑盒

36208ES60

100 mL

329.00

36208ES76

500 mL

1289.00

36208ES80

1000 mL

2349.00

Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit

增強型ECL化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒

36222ES60

100 mL

259.00

36222ES76

500 mL

1089.00

36222ES80

1000 mL

1989.00

SuperSignal SuperDura Extended Duration Substrate

持久性化學(xué)發(fā)光底物

36223ES10

10 mL

267.00

36223ES60

100 mL

1557.00

36223ES70

200 mL

2857.00

36223ES76

500 mL

5257.00

SuperSignal MaxiSignal Maximum Sensitivity Substrate

zui高靈敏度化學(xué)發(fā)光底物

36224ES10

10 mL

287.00

36224ES60

100 mL

1757.00

36224ES70

200 mL

3257.00

36224ES76

500 mL

5857.00

8. 相關(guān)產(chǎn)品推薦

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

價格

X射線攝影暗盒（小號）

36243ES35

5 7英寸

129.00

X射線攝影暗盒（中號）

36243ES58

8 10英寸

169.00

X光片

36209ES01

1盒(100片)

227.00

Fixing Powder 定影粉

36210ES01

包

20.00

Developing Powder 顯影粉

36211ES01

包

20.00

Primary Secondary Antibody Diluent for WB

WB專用一抗二抗稀釋液

36206ES60

100 mL

147.00

36206ES76

500 mL

538.00