定點突變是指通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因組，也可以是質(zhì)粒）中引入所需變化（通常是表征有利方向的變化），包括堿基的添加、刪除、點突變等。定點突變能迅速、的提高DNA所表達(dá)的目的蛋白的性狀及表征，是基因研究工作中一種非常有用的手段。

定點突變一般有以下流程：

1.對待突變基因測序結(jié)果進(jìn)行分析，設(shè)計突變方案；

2.根據(jù)突變方案設(shè)計合成覆蓋突變位點的雙向引物，合成目的DNA兩端引物，進(jìn)行高保真PCR反應(yīng)；

3.默認(rèn)情況下，將PCR產(chǎn)物克隆至T載，或者根據(jù)要求亞克隆至目的載體；DNA測序驗證突變序列的正確性。

定點突變一般須有含有待突變基因的高純度質(zhì)粒，不少于10 g，電泳圖清晰，達(dá)酶切及測序要求。

定點突變的意義：

根據(jù)生物學(xué)理論知識，基因會發(fā)生突變，突變可以自發(fā)，也可以誘發(fā)。但在加拿大生物化學(xué)家M 史密斯（1932－2000年）發(fā)明定點突變法之前，突變株的產(chǎn)生必須經(jīng)由自然界或用化學(xué)等方法誘使基因體突變。這類方法屬于隨機突變，突變株必須在生物形狀上有所改變，才能確定有突變發(fā)生，但除非用分子生物方法或遺傳方法找到此突變處，否則無法確定突變位置。也就是說，這種突變是盲目的。而史密斯發(fā)明的定點突變法卻是有目的的，該法可經(jīng)由設(shè)計好的寡核苷酸，在任何一個基因片段上進(jìn)行隨意或設(shè)計好的突變，也就是說，這種突變是預(yù)先設(shè)定好的，所以也有人將該法稱為 反遺傳法 。

定點突變用途：

幾乎每個生物實驗室都會用定點突變法來研究基因或蛋白質(zhì)的功能。定點突變法的應(yīng)用不僅廣泛用于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，還可用于農(nóng)業(yè)培育抗蟲、抗病的良種，用于醫(yī)學(xué)矯正遺傳病、治療癌癥等病。

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