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放線菌屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)_91化工儀器網(wǎng)

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2019-09-02  來(lái)源:儀器信息網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):306
核心提示:放線菌屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒中英文名稱規(guī)格價(jià)格說(shuō)明書(shū)Actinomyces spp.放線菌屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒50次2490元運(yùn)輸:低溫保存:負(fù)20度有效期:一年貨期:2-3周產(chǎn)品及特點(diǎn)1.即開(kāi)即用,用戶只需要提供放線菌樣品。2.根據(jù)放線菌屬通用染料法熒光定量保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。3.靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。4.一管式熒光定量PCR檢測(cè),避免后續(xù)污染。5.本試劑盒足夠50次20 L反應(yīng)體系的熒光定量PCR。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。規(guī)格及成

放線菌屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒

 

中英文名稱

規(guī)格

價(jià)格

說(shuō)明書(shū)

Actinomyces spp.

放線菌屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒

50次

2490元

 

運(yùn)輸:低溫

保存:負(fù)20度

有效期:一年

貨期:2-3周

產(chǎn)品及特點(diǎn)

1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供放線菌樣品。

2. 根據(jù)放線菌屬通用染料法熒光定量保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。

3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。

4. 一管式熒光定量PCR檢測(cè),避免后續(xù)污染。

5. 本試劑盒足夠50次20 L反應(yīng)體系的熒光定量PCR。

本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

規(guī)格及成分

成分

編號(hào)

十孔盒包裝

2 qPCR MagicMix

試劑一

500 L(棕色管)

熒光PCR專用模板稀釋液

試劑二

1 mL(黃蓋)

放線菌屬通用染料法熒光定量PCR引物混合物

試劑三

100 L(白蓋)

放線菌屬通用染料法熒光定量PCR陽(yáng)性對(duì)照

(1 10E8 拷貝/ L)

試劑四

50 L(紅蓋)

使用手冊(cè)

試劑五

1份

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限一年。

自備試劑 

DNA模板、10 ROX(根據(jù)機(jī)型決定,具體見(jiàn)使用方法)。

使用方法

一、稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照(以10E2-10E7拷貝/ L這6個(gè)10倍稀釋度為例)

1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。

2. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 L熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。

4. 在7號(hào)管中加入5 L 1 10E8拷貝/ L 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩1分鐘,得1 10E7拷貝/ L的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

5. 換槍頭,在6號(hào)管中加入5 L 1 10E7拷貝/ L 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1 10E6拷貝/ L的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

6. 換槍頭,在5號(hào)管中加入5 L 1 10E6拷貝/ L的陽(yáng)性對(duì)照到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得1 10E5拷貝/ L的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?0 L上步制備的PCR陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)(濃度為1 10E4 拷貝/ L,10 L相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝)或第5號(hào)(濃度為1 10E5 拷貝/ L,10 L相當(dāng)于10萬(wàn)拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200 L樣品,則PC和NC的體積也必須是200 L。

9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 L體系,在樣品制備室進(jìn)行)

10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。

11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加):

成分

樣品管

N+2個(gè)

PCR陰性對(duì)照管

PCR陽(yáng)性

對(duì)照管(2-7管)

2 qPCR MagicMix

(棕色管)

10  L

10  L

各10  L

放線菌屬通用染料法熒光定量PCR

引物混合液(白蓋)

2  L

2  L

各2  L

自備10 ROX (見(jiàn)注)

2 L

2 L

各2 L

 N+2待測(cè)樣品DNA模板

6  L

不加

不加

第7步所得PCR陽(yáng)性對(duì)照

稀釋液(2-7號(hào))

不加

不加

各6 L(2號(hào)樣到2號(hào)管,3號(hào)樣到3號(hào)管 )

注:僅ABI7500、7700和7900儀器需要使用ROX作為對(duì)照,其他熒光PCR儀器(如iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000和LightCycler480)不需要使用ROX,則用水替代。

12. 蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行PCR(具體PCR參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化)。

過(guò)程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

92℃

5分鐘

PCR反應(yīng)

(30個(gè)循環(huán))

92℃

60 秒

54℃

60 秒

72℃

60 秒

13. 數(shù)據(jù)采集

具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA時(shí),大吸收光譜在471 nm,結(jié)合DNA時(shí)的大吸收光譜在500 nm,大發(fā)射光譜在530 nm。信號(hào)采集可以設(shè)置在復(fù)性或延伸步驟。 

四、數(shù)據(jù)處理

14. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè),則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,再推算出其濃度。

如果把本試劑盒用于定性檢測(cè),只判斷陽(yáng)性或陰性,則陰性對(duì)照Ct必須大于或等于40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng),有典型擴(kuò)增曲線,Ct值應(yīng)該小于或等于30。對(duì)待測(cè)樣品,如果其Ct大于或等于40則為陰性,如果小于或等于35則為陽(yáng)性。如果在35-40之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的Ct值如果大于或等于40則為陰性,如果小于40,則為陽(yáng)性。


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