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如何驗(yàn)證抗體參數(shù),確保特異性,選擇性和重復(fù)性——中國(guó)生物器材網(wǎng)

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2019-06-24  來(lái)源:儀器信息網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):1031

你有沒(méi)有從抗體供應(yīng)商那里訂購(gòu)過(guò)抗體? 你遇到過(guò)抗體特異性,選擇性和重復(fù)性出問(wèn)題嗎? 你是否曾將抗體退回給供應(yīng)商,卻收到另一份劣質(zhì)產(chǎn)品嗎? 如果你對(duì)上述問(wèn)題的回答是肯定的,那么你也遭受過(guò) 壞 抗體的毒害。


 

        據(jù)估計(jì),所有購(gòu)買(mǎi)的抗體中約有50%是 壞的 ,僅在美國(guó)就浪費(fèi)了約3.5億美元。 研究人員可以使用的僅供研究(RUO)使用的抗體超過(guò)400萬(wàn)種,因此記住兩件事是重要的:選擇好的廠家;盡可能在實(shí)驗(yàn)室做交叉驗(yàn)證。 在本文中,我們討論的就是如何驗(yàn)證購(gòu)買(mǎi)抗體的參數(shù)(即選擇性,特異性結(jié)合/解離速率,平衡常數(shù)),以確保你獲得高質(zhì)量抗體,從而節(jié)省你的時(shí)間和金錢(qián)。

 

三種類(lèi)型的抗體

         在抗體領(lǐng)域,有三大類(lèi)抗體:多克隆,單克隆和重組抗體。多克隆和單克隆抗體由免疫系統(tǒng)中的記憶B細(xì)胞產(chǎn)生,其分泌抗體應(yīng)對(duì)外來(lái)抗原。多克隆抗體具有識(shí)別和結(jié)合相同抗原上的不同表位的能力,而單克隆抗體識(shí)別并結(jié)合抗原上的單個(gè)表位。這些抗體類(lèi)別之間的主要區(qū)別在于它們的特異性:?jiǎn)慰寺】贵w是高度特異性的,而多克隆抗體更可能發(fā)生交叉反應(yīng),從而降低特異性。值得注意的是,重組抗體(即通過(guò)DNA重組,表達(dá),純化等在體外產(chǎn)生)表現(xiàn)出與單克隆抗體相似的方式,但具有許多生產(chǎn)優(yōu)勢(shì),包括快速生產(chǎn),更快的周轉(zhuǎn)時(shí)間和不需要宿主動(dòng)物。理論上,重組抗體技術(shù)將成為主要的抗體生產(chǎn)方法(Bradbury,A.,&Pl ckthun,2015)。

 

        雖然許多抗體生產(chǎn)商和抗體分銷(xiāo)商提供了分析證書(shū)(CoA),Western blot和/或ELISA數(shù)據(jù),但有些公司不提供此信息,因此保持警惕,成為聰明的消費(fèi)者和明智地選擇抗體是非常重要的。此外,許多使用Western blot或ELISA等技術(shù)驗(yàn)證抗體的生產(chǎn)商就聲稱(chēng)抗體適用于多種應(yīng)用(如IHC或流式),但沒(méi)有支持性文件;如此便出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室抗體質(zhì)量難保證的危機(jī)。驗(yàn)證購(gòu)買(mǎi)抗體的參數(shù),如選擇性,特異性,序列數(shù)據(jù)和結(jié)合/解離率以及平衡常數(shù),可以讓生產(chǎn)者承擔(dān)其責(zé)任,并確保你獲得高質(zhì)量抗體做研究。


結(jié)合常數(shù)及表面等離子體共振技術(shù)檢測(cè)的重要性
 

 

        于2016年發(fā)表在Journaltical Analytical Chemistry Insights上的論文中,作者指出,由于抗體結(jié)合常數(shù)是靜態(tài)特性,并且只有一小部分抗體在說(shuō)明書(shū)會(huì)加上親和力數(shù)據(jù), 遺憾的是,很少對(duì)抗體及其抗原進(jìn)行親和常數(shù)的測(cè)定 (Weller,2016)。在該文章中,作者認(rèn)為最受歡迎的表征結(jié)合常數(shù)和驗(yàn)證抗體質(zhì)量的方法是表面等離子體共振(SPR)。還有其他可用于檢測(cè)結(jié)合常數(shù)技術(shù),但不幸的是,這些技術(shù)通常使用大量樣本,需要標(biāo)記,不能提供足夠的信息和/或需要大量的費(fèi)用。而表面等離子體共振(SPR)可獲得抗體完整的動(dòng)力學(xué)參數(shù),已成為幾十年來(lái)獲得定量結(jié)合動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)的金標(biāo)準(zhǔn)。
 

Nicoya的OpenSPR 采用創(chuàng)新LSPR技術(shù),操作簡(jiǎn)單,出結(jié)果速度快且低維護(hù)成本及 低技術(shù)門(mén)檻 ,是下一代SPR解決方案技術(shù),自2015年上市,全球已突破450臺(tái)的銷(xiāo)量,被數(shù)百名研究人員使用并發(fā)表文獻(xiàn)。OpenSPR實(shí)現(xiàn)了在你自己實(shí)驗(yàn)室工作臺(tái)上使用SPR技術(shù), 可以快速高效的獲得高質(zhì)量數(shù)據(jù)用于發(fā)表文章。
 

 

SPR不僅對(duì)發(fā)表文章是必要的,而且對(duì)于許多醫(yī)學(xué)和醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的進(jìn)步是必要的,如下圖可以看到的那樣,依賴(lài)于SPR數(shù)據(jù)的文章成顯著增加趨勢(shì),足以顯示SPR技術(shù)的重要性。


OpenSPR分子互作在抗體檢測(cè)中的優(yōu)勢(shì)
 

多參數(shù)檢測(cè)---Ka、Kd、KD、EC50、蛋白濃度測(cè)定
創(chuàng)新LSPR技術(shù)--- 檢測(cè)不受溫度、緩沖液折射率影響
易操作---1-2小時(shí)快速掌握
寬范圍檢測(cè)---pM-mM
 低成本--- 實(shí)時(shí)無(wú)標(biāo)記、芯片可再生
 

 
 
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