生物熒光-熒光素酶分析經(jīng)常用于檢測ATP量

生物熒光
  生物熒光是激發(fā)態(tài)時(shí)生物分子發(fā)出可被測定熒光的過程，這個(gè)
過程可被用來測定微生物代謝產(chǎn)物中ATP的量。理論上，測定ATP的
量可以反映活細(xì)胞數(shù)量，因?yàn)榛罴?xì)胞數(shù)越多，產(chǎn)生的ATP量越多。
單個(gè)酵母細(xì)胞產(chǎn)生的ATP量要多于單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞產(chǎn)生的量，因此對(duì)
酵母的檢出限可以低至10個(gè)細(xì)胞。
  熒光素一熒光素酶分析經(jīng)常用于檢測ATP的量，因此熒光素一
熒光素酶生物熒光技術(shù)已越來越多地替代傳統(tǒng)消毒和平板計(jì)數(shù)法來
檢測無菌程度?，F(xiàn)在，又有一些生物熒光檢測試劑盒投放市場。只
要購買檢測器后，每次測試只需包括樣品收集容器、消毒和其他試
劑的費(fèi)用，價(jià)格便宜。雖然該方法已被應(yīng)用于酒精類和非酒精類飲
料的生產(chǎn)中，但是通過檢測ATP的量來推算活細(xì)胞的量存在一個(gè)很
大的弊端。微生物種類不同以及同種微生物所處的生理狀態(tài)不同(
如受傷狀態(tài)、饑餓狀態(tài)等)，ATP的產(chǎn)生量相差很大。而且，該方法
不能分辨由酵母或是別的微生物產(chǎn)生的ATP，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果難以詮釋
。比濁法和光密度
  一直以來，分光光度計(jì)與濁度測定儀被微生物學(xué)家用來快速檢
測細(xì)胞密度和特定化合物濃度(如顏色、蘋果酸等)。分光光度計(jì)是
檢測光通過某種樣品溶液后被吸收或是通過的光強(qiáng)度，濁度測定儀
測定的是光的散射程度。
  分光光度計(jì)接收通過的光(420nm或者650nm)與光源處在同一條
直線上，而濁度測定時(shí)需與光源垂直。要事先繪制好吸光值和細(xì)胞
密度或其他一些參數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，才可以通過測定吸光值推算出未
知樣品的細(xì)胞密度等。因此一個(gè)成功的應(yīng)用就是需要用其他計(jì)數(shù)方
法來校正吸光度，最常用的就是直接平板計(jì)數(shù)法。

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