一般透射電鏡觀察的標(biāo)本,要求將細(xì)胞切成50一70mm切片
切片
一般透射電鏡觀察的標(biāo)本,要求將細(xì)胞切成50一70mm的薄片,即超
薄切片。切片前需對標(biāo)本塊進行修整,去除周圍多余的包埋劑與不必要
的部分,使樣品形狀與大小適于切片,并且使其硬度一致。目前常用LK
B修塊機進行機械修整.
超薄切片常用的刀片是玻璃刀,有時亦用鉆石刀。制作玻璃刀的玻
璃要求干凈,質(zhì)硬,含硅量在72%~了5gb,制刀時用LKB7800型制刀機
將玻璃條切割成3mmX 3mm的正方形或3mmX 4mm的長方形玻璃塊,召在近
乎對角的部位切開,形成三角形的玻璃刀。制成的玻璃刀,必須進行質(zhì)
量檢查才能使用。檢查的方法可借助于切片機的雙筒顯微鏡來進行。一
把好的刀,其刀刃可見到一條彎曲平滑的應(yīng)力線,從左側(cè)刀角開始向右
逐漸彎曲。在應(yīng)力線起始處上方的刀刃占全長的1/5一l/3是超薄切片
的部位。
為利于把切片收集到帶膜的載網(wǎng)上和避免發(fā)生皺紋,需在玻璃刀上
制備水槽,受納切好的標(biāo)本。可用黑色或銀色的塑料粘性絕緣膠帶粘于
制成的玻璃刀上,底面與刀背垂直,頂端不高于刀刃,橫斷面不突出于
刀背之外,再用熔化石蠟封閉膠帶與玻璃的結(jié)合部位,形成一個不漏水
的小槽,用注射器將蒸餾水滴入槽內(nèi),直至刀刃被浸濕為止。
切片一般用LKB超簿切片機切片,厚度由加熱器的電流決定,切速
為2、5、10、20mm/h時,切片周期固定為4s。切片時,先將標(biāo)本夾在
切片機臂上,再將玻璃刀夾緊,并與刀座上的標(biāo)尺高度相等,移動顯微
鏡,使之能見到標(biāo)本塊,再使玻璃刀向前推進,把標(biāo)本中心對準(zhǔn)刀刃的
最好部位,開動切片機即可切片。
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