凝膠的特征-瓊脂糖是從海藻中提取的多糖

電泳法分離核酸
  電泳法在分離和純化生物大分子方面應(yīng)用廣泛，尤其是蛋白質(zhì)
和核酸方面的應(yīng)用。這些帶電物質(zhì)的分離，是因為在直流電場下它
們在緩沖液中具有不同的遷移速率。由于核酸分子的磷酸骨架帶有
負(fù)電荷，所以在電泳過程中核酸會向正極移動；另外蛋白質(zhì)為兩性
物質(zhì)，根據(jù)其帶電性質(zhì)可確定其遷移方向。

  凝膠電泳法提純核酸
  凝膠電泳可通過DNA的大小將其分離二凝膠中加入DNA片段后在
凝膠兩端施加電位，因為DNA分子帶負(fù)電，它會向正極移動；而受
到凝膠基質(zhì)的阻礙，較大的片段移動減慢，較小的片段則移動較快
。帶有阻力的凝膠相當(dāng)于分子篩，從而依據(jù)片段大小將其分離，大
分子遷移率取決于凝膠聚合強度、分子大小和形狀以及緩沖液的離
子強度和溫度。染色后，分離的大分子會在凝膠上顯示為從一端到
另一端的一系列條帶。

  凝膠電泳分離法最常用的瓊脂糖凝膠電泳．帶眼井的凝膠薄板
可以作為樣品的載體，它浸沒在一定pH值和離子強度的緩沖液中。
用染色劑(如5μm／mL EB)進行染色，可通過觀察熒光來檢測DNA。
電泳后向DNA樣本中加入載體染料，相當(dāng)于將DNA標(biāo)記；染料中也含
有甘油和蔗糖，可將提高樣本的密度，使其沉淀到凝膠的井底?常
用的兩種凝膠為瓊脂糖和聚丙烯酰胺。

凝膠的特性

  瓊脂糖是一種從海藻中提取的平均分子量為12000的線性多糖
，它由瓊脂的重復(fù)單位組成，由半乳糖和3，6一葡萄糖分子交替構(gòu)
成。瓊脂糖所用的濃度一般在0．5％～3％之間、瓊脂糖凝膠是將
粉末狀的瓊脂糖凝膠溶解于緩沖液中煮沸后形成無色溶液，冷卻后
倒出形成凝膠塊，瓊脂糖凝膠塊易碎，操作時應(yīng)小心，避免其被破
壞二瓊脂糖濃度越高，凝膠塊就越硬，形成的孔徑就越小。大分
子的電泳遷移率與其能通過孔徑的體積分?jǐn)?shù)成正比。加入適當(dāng)濃
度的瓊脂糖，施加合適的電場，可分離長度在200～50000bp范圍內(nèi)
的DNA片段；應(yīng)用脈沖場凝膠電泳(電泳槽中電流方向周期性變化)
可以分離50000～5000000bp的超大片段核酸。瓊脂糖凝膠電泳比聚
丙烯酰胺凝膠電泳速度快，然而前者因為孔徑較大，所以分離能
力較后者低．在一定的瓊脂糖濃度下，待檢測的DNA片段遷移率與D
NA片段長度(bp)的對數(shù)呈線性關(guān)系

(本文由上海光學(xué)儀器廠編輯整理提供, 未經(jīng)允許禁止復(fù)制http://www.sgaaa.com)