生物學(xué)物理特征復(fù)合物層析檢測生物顯微鏡

親和層析
  原理親和層析是利用了大分子最獨(dú)特的特性，即生物學(xué)特異性來
純化一種大分子的。因此，與通透層析和電泳等方法相比，親和層
析從理論上講是能產(chǎn)生一個(gè)絕對的純化作用，而通透層析和電泳等
方法是以物理特性為基礎(chǔ)的(對于一些有關(guān)的大分子來說，這些特
性可能是十分相似的)，所以往往不能得到所需要的純度。
  迄今，這種技術(shù)主要是用于蛋白質(zhì)的純化，但是從原理上說，
也同樣能適用于抗原和抗體;維生素、激素和藥物的結(jié)合蛋白;藥物
“受休，’運(yùn)載蛋白;多核蛋白體復(fù)合物;多酶復(fù)合物和阻遏物的
純化。
  以酶作為例子，由于它的立體結(jié)構(gòu)，所以只有很少數(shù)的化合物
(配位體)能達(dá)到它的活性位置和調(diào)節(jié)位置，這些化合物可能是底物
或是一種可逆的或不可逆型的效應(yīng)物。就是對這些位置的特異的識(shí)
別，構(gòu)成了酶親和層析的基礎(chǔ)。倘若，這位置對配位體有很高的親
和力，結(jié)合是可逆的，并且在所選擇的實(shí)驗(yàn)條件下配位體結(jié)合到位
置上后不發(fā)生任何反應(yīng)，那么純化是可能的。
  基本上，這技術(shù)是通過一種方式把配位休(通常是一種可逆的
競爭抑制劑)共價(jià)地結(jié)合到一種適宜的不溶性的基質(zhì)上，而又不損
傷它與酶的結(jié)合能力。然后把一個(gè)雜的酶溶液加到浸泡在恰當(dāng)緩沖
液中的經(jīng)配位體結(jié)合過的基質(zhì)柱上。酶被選擇性地留在柱上，不結(jié)
合的雜質(zhì)被洗脫下來。隨后，用一種在不同pH和(或)不同離子強(qiáng)度
的介質(zhì)中的底物溶液把酶取代下來。
  因此，這方法需要預(yù)先詳細(xì)地認(rèn)識(shí)酶的動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)，以便可以
小心地設(shè)計(jì)最佳的實(shí)驗(yàn)條件。所選擇的實(shí)驗(yàn)條件盡可能地與在一個(gè)
正常的分離系統(tǒng)中研究酶的條件相一致。
  必須認(rèn)識(shí)到在任何一種大分子的純化中，方法的原理遵循如下
的通式:隨著大分子逐漸被加到柱上，由于這過程是可逆的，因而
促使了已停留在柱頂部的，但還沒有真正被結(jié)合的另外一些大分子
的結(jié)合。結(jié)果，出現(xiàn)了一個(gè)動(dòng)態(tài)的過程，除了在復(fù)合物內(nèi)的結(jié)合強(qiáng)
度增加外，復(fù)合物的濃度也增加了。由此決定了純化過程的效力。
由于在加樣時(shí)柱的效力逐漸增加，因此柱式方法必然要比杯式法更
有效。

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