銘修（上海）生物科技有限公司

主營(yíng)產(chǎn)品： 各種標(biāo)準(zhǔn)品、試劑、染色液、培養(yǎng)基、抗體、試劑盒、透析袋 細(xì)胞、實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器

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食物總抗氧化能力（TAC）比色法（FRAP）定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

2017/12/28 閱讀(641)

食物總抗氧化能力（TAC）比色法（FRAP）定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

（中文版）

 

主要用途

 

 食物總抗氧化能力（TAC）比色法（FRAP）定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)使用三吡啶基三嗪鐵復(fù)合物，在抗氧化劑的存在下，還原產(chǎn)生藍(lán)色的亞鐵產(chǎn)物，通過(guò)分光光度儀，觀察其峰值下降的變化，來(lái)定量檢測(cè)對(duì)應(yīng)于標(biāo)準(zhǔn)水溶性生育酚Trolox的總抗氧化能力，即抑制氧化等值濃度的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適用于各種新鮮食物的總抗氧化能力檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)易，性能穩(wěn)定。

 

技術(shù)背景

 

超氧自由基陰離子（superoxide radical；O2-）、過(guò)氧化氫（hydrogen peroxide；H2O2）、羥自由基或氫氧基（hydroxyl radical；OH-）、過(guò)氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氫過(guò)氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、過(guò)氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、單線態(tài)氧氣（singlet oxygen）等細(xì)胞內(nèi)活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產(chǎn)生和增多，將導(dǎo)致細(xì)胞衰老或凋亡，甚而導(dǎo)致諸如冠心病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腫瘤、退行性病變等各種病理狀況。在生物系統(tǒng)內(nèi)，通過(guò)抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶等，大分子，例如白蛋白、銅藍(lán)蛋白（ceruloplasmin；CER）、鐵蛋白（ferritin）和抗氧化因子，例如生育醇、類胡蘿卜素、抗壞血酸、還原性谷胱甘肽和尿酸膽紅素（bilirubin）等，產(chǎn)生抗氧化能力，即捕獲自由基的能力，達(dá)到消除或降低ROS的損害。通過(guò)正鐵還原抗氧化力（ferric reducing antioxidant power；FRAP）檢測(cè)，即使用氯化鐵和三吡啶基三嗪（2,4,6-tripyridyltriazine；TPTZ）產(chǎn)生的三吡啶基三嗪鐵復(fù)合物（Fe3-TPTZ），受到抗氧化劑作用還原為三吡啶基三嗪亞鐵復(fù)合物（Fe2-TPTZ），呈現(xiàn)出藍(lán)色，以 衡量體系中消耗抗氧化劑的能力，在分光光度儀（593nm波長(zhǎng)）的幫助下，觀察其峰值下降的變化，并與標(biāo)準(zhǔn)化抗氧化劑水溶性生育酚Trolox對(duì)照。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

 清理液（Reagent A）  500毫升

 緩沖液（Reagent B）  20毫升

 染色液A（Reagent C）  1毫升

 染色液B（Reagent D）  1毫升

 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）  200微升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)  1份

 

保存方式

 

保存 染色液A（Reagent C）、 染色液B（Reagent D）和 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里； 染色液A（Reagent C）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

 

用戶自備

 

50毫升燒杯：用于樣品操作的容器

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于標(biāo)準(zhǔn)樣品配制的容器

4℃臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作

培養(yǎng)箱：用于孵育反應(yīng)

200微升1厘米光徑比色皿或96孔板：用于比色的容器

分光光度儀或酶標(biāo)儀：用于比色分析

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

樣品準(zhǔn)備

 

1、固態(tài)食品處理

秤取1克固態(tài)食品或粉末到50毫升燒杯，杯口封口膜密封加入8毫升 清理液（Reagent A）攪拌30分鐘，充分混勻繼續(xù)加入 清理液（Reagent A）到終容量為10毫升過(guò)濾紙過(guò)濾，去除不溶性固體顆粒封口膜封口備用

 

2、液態(tài)食品處理

移取5毫升待測(cè)液態(tài)食品到15毫升錐形離心管放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1500g 移取上清液到新的15毫升錐形離心管（選擇步驟）可以加入適量的 清理液（Reagent A） （選擇步驟）過(guò)濾紙過(guò)濾（如果離心處理，樣品仍然不清澈）置于冰槽里備用或放進(jìn)-20冰箱里保存

 

二、標(biāo)準(zhǔn)液準(zhǔn)備

 

準(zhǔn)備好5個(gè)1.5毫升離心管，標(biāo)記為1至5號(hào)管移取100微升 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）到1號(hào)管分別移取50微升 緩沖液（Reagent B）到2至5號(hào)管小心移取1號(hào)管的 50微升 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）到2號(hào)管，混勻小心移取50微升2號(hào)管稀釋的 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）到3號(hào)管，混勻小心移取50微升3號(hào)管稀釋的 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）到4號(hào)管，混勻?qū)?至5號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用，避免光照；標(biāo)準(zhǔn)管濃度見(jiàn)下表

 

管號(hào)

 緩沖液（Reagent B）

 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）

測(cè)定體系

標(biāo)準(zhǔn) Trolox濃度

1

0微升

100微升

300微摩爾/升

2

50微升

50微升

150微摩爾/升

3

50微升

50微升

75微摩爾/升

4

50微升

50微升 

37.5微摩爾/升

5

50微升

0

0

 

樣品測(cè)讀

 

準(zhǔn)備1個(gè)96孔板，做好標(biāo)記：空白對(duì)照孔、標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照孔、樣品孔分別移取200微升 緩沖液（Reagent B）到96孔板里的每個(gè)孔里分別加入20微升 染色液A（Reagent C）分別加入20微升 染色液B（Reagent D）加入10微升 緩沖液（Reagent B）到空白對(duì)照孔里加入10微升上述配制的 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）到相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照孔里加入10微升細(xì)胞裂解樣品（100微克蛋白總量）到樣品孔里震動(dòng)96孔板，使其混勻在37℃培養(yǎng)箱里孵育30分鐘即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀里測(cè)讀：593nm波長(zhǎng)分析結(jié)果：構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為吸光單位（OD593nm）；橫座標(biāo)（X軸）為標(biāo)準(zhǔn)Trolox濃度（微摩爾/升）空白對(duì)照孔為zui大吸光單位（OD593nm）讀數(shù)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照孔和樣品孔為實(shí)際吸光單位（OD593nm）讀數(shù) 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)Trolox濃度（微摩爾/升）計(jì)算樣品實(shí)際總抗氧化能力

 

【根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)Trolox濃度（微摩爾/升）X 0.25（體系容量；毫升） X 樣品稀釋倍數(shù)】 0.01（樣品容量；毫升）＝（微摩爾/升TROLOX等值）

 

根據(jù)下列公式計(jì)算測(cè)定體系中樣品量的總抗氧化能力（實(shí)際抑制百分率）

 

【（空白對(duì)照孔吸光單位讀數(shù)－實(shí)際吸光單位讀數(shù)） 空白對(duì)照孔吸光單位讀數(shù)】X100％

 

IC50：50％抑制率所需的樣品單位：TROLOX等值或樣品蛋白濃度（毫克/毫升）或樣品容量（微升）

 

 X（所需樣品單位）＝（已知樣品單位 實(shí)際抑制百分率）X 50％

 

注意事項(xiàng)

 

本產(chǎn)品為50次操作本產(chǎn)品測(cè)試范圍為25至800微摩爾操作時(shí)，須戴手套樣品制備的所有操作均須在4℃狀態(tài)下進(jìn)行測(cè)試前，樣品須新鮮收集樣品須清澈樣品避免含有Tris、EDTA和還原劑等 樣品讀數(shù)越低，抗氧化能力越高樣本量不宜超過(guò)20微升可以使用比色皿檢測(cè)如果樣品抗氧化劑濃度過(guò)高或過(guò)低， 建議稀釋或增加樣品濃度 如果測(cè)試樣品很多，建議使用排槍移液本公司提供系列抗氧化分析試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感

 

 

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