商品貨號:MS1001
英文名稱:Micro Lacate Dehydrogenase(LDH)Assay Kit
別名:乳酸脫氫酶試劑盒 LDH Kit 乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒 乳酸脫氫酶(LDH)測試盒
檢測方法:微量法
商品貨號:商品品牌:規(guī)格基本售價選擇規(guī)格MS1001-100管/48樣索橋生物100管/48樣¥330.00元
產(chǎn)品詳細(xì)介紹 產(chǎn)品說明書
測定意義:
LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng),伴隨著NAD+/NADH之間互變。
測定原理:
LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。
貨號:MS1001 規(guī)格:100管/48樣
乳酸脫氫酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)試劑盒說明書
微量法
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng),伴隨著NAD+/NADH之間互變。
測定原理:
LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。
自備實驗用品及儀器:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:60mL 1瓶, 4℃保存;
試劑一:液體5mL 1瓶, 4℃保存;
試劑二:粉劑 1支,-20℃保存,用時加入1.3 mL蒸餾水充分溶解備用,用不完的試劑
分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;
試劑三:液體5 mL 1瓶,4℃避光保存;
試劑四:液體20mL 1瓶,4℃保存;
樣品測定的準(zhǔn)備:
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為1000~5000:1的比例(建議2000萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定步驟:
分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm,蒸餾水調(diào)零。2、樣本測定(在EP管中加入下列試劑)
試劑名稱( L)
測定管
對照管
樣本
10
10
試劑一
50
50
試劑二
10
蒸餾水
10
充分混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)準(zhǔn)確水浴15min
試劑三
50
50
充分混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)準(zhǔn)確水浴15min
試劑四
150
150
充分混勻,室溫靜置15min, 450 nm下測定吸光度,計算 A=A測定管-A對照管。每個測定管需要設(shè)一個對照管。
LDH活力單位的計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸曲線, y = 0.725x (x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度, mol/mL;y為對吸光度)。
2、血清(漿)LDH活力的計算
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH(nmol/min/mL)= A 0.725 T 103=92 A
3、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中LDH活力的計算
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH(nmol/min/mg prot)=[ A 0.725 V1] (V1 Cpr) T 103 =92 A Cpr
需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。
(2) 按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH(nmol/min/g鮮重)=[ A 0.725 V1] (W V1 V2) T 103 =92 A W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH(nmol/min/104 cell)= [ A 0.725 V1] (2000 V1 V2) T 103 =0.046 A
V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.01mL;V2:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,15 min;Cpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;2000:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),2000萬;103:1umol/mL=103 nmol/mL。
b.使用96孔板測定的計算公式如下:
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸曲線, y = 0.3625x (x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度, mol/mL;y為對吸光度)。
2、血清(漿)LDH活力的計算
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH(nmol/min/mL)= A 0.3625 T 103=184 A
3、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中LDH活力的計算
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH(nmol/min/mg prot)=[ A 0.3625 V1] (V1 Cpr) T 103 =184 A Cpr
需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。
(2) 按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH(nmol/min/g鮮重)=[ A 0.3625 V1] (W V1 V2) T 103 =184 A W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH(nmol/min/104 cell)= [ A 0.3625 V1] (2000 V1 V2) T 103 =0.092 A
V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.01mL;V2:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,15 min;Cpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;2000:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),2000萬;103:1umol/mL=103 nmol/mL。
輔酶Ⅰ系列 QS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒可見分光光度法50管/24樣500MS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒微量法100管/48樣920QS1001乳酸脫氫酶(LDH)測試盒可見分光光度法50管/24樣170MS1001乳酸脫氫酶(LDH)測試盒微量法100管/48樣330QS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣280MS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒微量法100管/96樣550QS1003NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣320MS1003NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測試盒微量法100管/96樣600QS1004NADH氧化酶(NOX)測試盒 可見分光光度法50管/48樣450MS1004NADH氧化酶(NOX)測試盒 微量法100管/96樣850QS1005-50檸檬酸合酶(CS)測試盒可見分光光度法50管/48樣3200QS1005-25檸檬酸合酶(CS)測試盒可見分光光度法25管/24樣2000MS1005檸檬酸合酶(CS)測試盒微量法100管/48樣3500QS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒紫外分光光度法50管/48樣720MS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒微量法100管/96樣1400QS1007醇脫氫酶(ADH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣280MS1007醇脫氫酶(ADH)測試盒微量法100管/96樣550QS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒紫外分光光度法50管/48樣800MS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒微量法100管/96樣1550QS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣420MS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒微量法100管/96樣800QS1010NAD激酶(NADK)測試盒可見分光光度法50管/48樣600MS1010NAD激酶(NADK)測試盒微量法100管/48樣1100QS1011線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒 紫外分光光度法25管/24樣1280MS1011線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒 微量法100管/96樣2500
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