人 羥基丁酸脫氫酶( HBDH)ELISA試劑盒說明書

本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中 羥基丁酸脫氫酶( HBDH)的活性。

實(shí)驗(yàn)原理：

 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人 羥基丁酸脫氫酶( HBDH)水平。用純化的 羥基丁酸脫氫酶( HBDH)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入 羥基丁酸脫氫酶( HBDH)，再與HRP標(biāo)記的 羥基丁酸脫氫酶( HBDH)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 羥基丁酸脫氫酶( HBDH)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人 羥基丁酸脫氫酶( HBDH)濃度。

試劑盒組成：

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1份

1份

 

封板膜

2片（48）

2片（96）

 

密封袋

1個(gè)

1個(gè)

 

酶標(biāo)包被板

1 48

1 96

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品：900U/L

0.5ml 1瓶

0.5ml 1瓶

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.5ml 1瓶

1.5ml 1瓶

2-8℃保存

酶標(biāo)試劑

3 ml 1瓶

6 ml 1瓶

2-8℃保存

樣品稀釋液

3 ml 1瓶

6 ml 1瓶

2-8℃保存

顯色劑A液

3 ml 1瓶

6 ml 1瓶

2-8℃保存

顯色劑B液

3 ml 1瓶

6 ml 1瓶

2-8℃保存

終止液

3ml 1瓶

6ml 1瓶

2-8℃保存

濃縮洗滌液

（20ml 20倍） 1瓶

（20ml 30倍） 1瓶

2-8℃保存

 

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100 l，然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 l，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100 l分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 l，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50 l棄掉，再各取50 l分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50 l分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 l，混勻后從第七、第八孔中分別取50 l加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50 l，混勻后從第九第十孔中各取50 l棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50 l，濃度分別為600 U/L ，400 U/L， 200 U/L，100 U/L， 50U/L）。加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40 l，然后再加待測樣品10 l（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50 l，空白孔除外。溫育：操作同3。洗滌：操作同5。顯色：每孔先加入顯色劑A50 l，再加入顯色劑B50 l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.終止：每孔加終止液50 l，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

注意事項(xiàng)：

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間盡量控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，建議做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（ n 5）。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物請(qǐng)避光保存。嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。

2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和15%

保存條件及有效期：

1.試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個(gè)月

計(jì)算：

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)， 

在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD 

值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋  

倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo) 

準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值 

代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋  

倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。 

 

人IV型膠原（Col IV）說明書

人 半乳糖基抗體（Gal）ELISA試劑盒說明書
 

關(guān)注本網(wǎng)官方微信 隨時(shí)閱讀專業(yè)資訊