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Protein G是一種分離自G Streptococci的細(xì)胞壁蛋白,它可通過(guò)其Fc片段結(jié)合哺乳動(dòng)物IgG。
重組protein G含有高親和結(jié)合位點(diǎn),減少了非特異性吸附。
Protein G和Protein A有不同的lgG結(jié)合特性,相比Protein A, Protein G對(duì)牛、羊、馬等多克隆抗體有更強(qiáng)的結(jié)合力,
它還可以結(jié)合不能與Protein A很好結(jié)合的大鼠lgG、人lgG3和小鼠lgG1,具體結(jié)合能力見(jiàn)表2。
Protein A和Protein G對(duì)不同抗體的結(jié)合能力
種屬
亞型
Protein A 結(jié)合力
Protein G 結(jié)合力
Human
IgA
varible
IgD
IgE
IgG1
++++
++++
IgG2
++++
++++
IgG3
++++
IgG4
++++
++++
IgGM
varible
Avian egg yolk
IgY
Cow
++
++++
Dog
++
+
Goat
++
Guinea pig
IgG1
++++
++
IgG2
++++
++
Hamster
+
++
Horse
++
++++
Koala
+
Liama
+
Monkey(rhesus)
++++
++++
Mouse
IgG1
+
++++
IgG2a
++++
++++
IgG2b
+++
+++
IgG3
++
+++
IgM
variable
Pig
+++
+++
Rabbit
no distinction
++++
+++
Rat
IgG1
+
IgG2a
++++
IgG2b
++
IgG3
+
++
Sheep
+/-
++
++++=結(jié)合能力強(qiáng); ++=結(jié)合能力中等; =結(jié)合能力弱或沒(méi)有結(jié)合
問(wèn)題及解決方案
問(wèn)題
原因分析
推薦解決方案
柱子反壓過(guò)高
篩板被堵塞
清洗或更換篩板
填料被堵塞
按照第3部分進(jìn)行樹(shù)脂清洗
裂解液中含有微小的固體顆粒,建議上柱前使用濾膜 (0.22或0.45 m) 過(guò)濾,或者離心去除。
樣品流速過(guò)低
樣品或緩沖液中有氣泡
去除樣品或柱子中的氣泡
樣品和緩沖液進(jìn)行脫氣
洗脫組分中沒(méi)有目的蛋白
樣品中抗體濃度太低
使用其抗原做配體的介質(zhì)
抗體被降解
適當(dāng)?shù)奶岣呦疵損H;
將樣品脫鹽或透析到合適的Buffer中
樣品與Protein G結(jié)合能力較弱
更換介質(zhì),如rProtein A Beads進(jìn)行純化
回收率逐漸減低
上樣量太多
減少上樣量
柱子太臟,載量降低
按照第3部分進(jìn)行樹(shù)脂CIP清洗
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