細(xì)胞傳代  人結(jié)腸癌細(xì)胞株 HT29細(xì)胞

1.  試驗(yàn)準(zhǔn)備：200 ul/1mlTip頭各一盒（以上物品均需高壓滅菌），酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號(hào)筆，培養(yǎng)皿，離心管。

2.  棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用1 ml的PBS溶液洗滌兩次。

3.  用Tip頭加入1 ml Trypsin液，消化1分鐘（37℃，5%CO2 ）。人結(jié)腸癌細(xì)胞株 HT29細(xì)胞用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細(xì)胞完全從壁上脫落下來(lái)為止。

4.  加入1 ml的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。

5.  用Tip頭多次吹吸，使細(xì)胞完全分散開。

6.  將培養(yǎng)液裝入離心管中，1 000 rpm離心5 min。

7.  用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇0.8X106個(gè)細(xì)胞加入一個(gè)35mm培養(yǎng)皿。

8.  將合適體積完全培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。

傳代時(shí)消化的問(wèn)題：可以這樣說(shuō)，對(duì)于需要消化傳代的細(xì)胞，每一次的消化都是對(duì)這個(gè)細(xì)胞存活與否，狀態(tài)好與不好zui至關(guān)重要的考驗(yàn)。
很多人都遇到過(guò)這個(gè)問(wèn)題，自己養(yǎng)的細(xì)胞開始的幾代長(zhǎng)的還挺好的，可是穿過(guò)幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細(xì)胞不行了，狀態(tài)越來(lái)越差勁了。對(duì)于這個(gè)問(wèn)題，可以非?？隙ǖ卣f(shuō)，你的消化環(huán)節(jié)出問(wèn)題了。你每一次的消化都讓細(xì)胞受到較大損傷了。所以，越長(zhǎng)越差。
在消化的過(guò)程中，你加入胰酶后，所有細(xì)胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個(gè)問(wèn)題就是，細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)是不一樣的，每一個(gè)細(xì)胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細(xì)胞消化同樣的時(shí)間對(duì)細(xì)胞是不公平的，他們受到了差別待遇當(dāng)然會(huì)有脾氣啊。。。。，后來(lái)對(duì)消化的方法進(jìn)行了改良。爭(zhēng)取做到因材施教。稱之為“四步消化法"。（以難消化細(xì)胞為例）xy-4901R   Annexin A7膜粘連蛋白7抗體
xy-9823R   C3orf153號(hào)染色體開放閱讀框15抗體
xy-6336R   APOB48R載脂蛋白B受體抗體
xy-6332R   ABCA2三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體
xy-6333R   ApoB 載脂蛋白B抗體
xy-6335R   ALOX15B花生四烯酸15脂氧合酶2抗體
xy-6338R   APOC4載脂蛋白C4抗體
xy-6337R   ARH低密度脂蛋白受體銜接蛋白抗體
xy-7550R   AUP1原始廣泛存在蛋白1抗體
xy-9398R   ANKRD37錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白37抗體
xy-7588R   A4GALTα1,4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶1
xy-7642R   AGTRAP血管緊張素Ⅱ受體相關(guān)蛋白抗體
xy-7669R   AX2R膜粘連蛋白2受體抗體
xy-0203R   ACEI血管緊張素1轉(zhuǎn)換酶抑制劑抗體
xy-1229R   AATF拮抗凋亡轉(zhuǎn)錄因子抗體
xy-0094R   AACT-Alpha1α-1抗胰糜蛋白酶抗體
xy-0096R   alpha 1 Antitrypsinα-1抗胰蛋白酶抗體
xy-1224R   ABCB6ATP結(jié)合蛋白家族6抗體
xy-1231R   ABCG1三磷酸腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗體
xy-0611R   Adiponectin receptor 2脂聯(lián)素受體2抗體
xy-9741R   ANGEL1ANGEL1蛋白抗體
xy-9742R   ANGEL2ANGEL2蛋白抗體
xy-9743R   ANKLE2ANKLE2蛋白抗體
xy-9744R   ANKMY1睪丸特異性錨樣蛋白1抗體
xy-9745R   ANKRD13B錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白13B抗體
xy-9746R   ANKRD20A1錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A1抗體
xy-9747R   ANKRD20A3錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A3抗體
xy-9748R   ANKRD22錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白22抗體
xy-9751R   ANKRD50錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白50抗體
xy-9753R   ATP6V1G2氫離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP合成酶6G抗體
xy-9755R   ANKRD26錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體
xy-9756R   ANKRD26錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體
xy-0728R   ACY3丙型肝炎病毒核結(jié)合蛋白-1抗體