人結(jié)腸癌細(xì)胞株 HT29細(xì)胞,供應(yīng)國(guó)內(nèi)外各類細(xì)胞ATCC/ICLC、、、、、傳代細(xì)胞,原代細(xì)胞,耐藥株,本公司細(xì)胞僅提供科研使用,不用于臨床,提供細(xì)胞說(shuō)明書。 【詳細(xì)說(shuō)明】
細(xì)胞傳代 人結(jié)腸癌細(xì)胞株 HT29細(xì)胞
1. 試驗(yàn)準(zhǔn)備:200 ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌),酒精棉球,廢液缸,試管架,微量移液器,記號(hào)筆,培養(yǎng)皿,離心管。
2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基,用1 ml的PBS溶液洗滌兩次。
3. 用Tip頭加入1 ml Trypsin液,消化1分鐘(37℃,5%CO2 )。人結(jié)腸癌細(xì)胞株 HT29細(xì)胞用手輕拍培養(yǎng)瓶壁,觀察到細(xì)胞完全從壁上脫落下來(lái)為止。
4. 加入1 ml的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。
5. 用Tip頭多次吹吸,使細(xì)胞完全分散開。
6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中,1 000 rpm離心5 min。
7. 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇0.8X106個(gè)細(xì)胞加入一個(gè)35mm培養(yǎng)皿。
8. 將合適體積完全培養(yǎng)液加入離心管中,混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中,使其均勻分布。
傳代時(shí)消化的問(wèn)題:可以這樣說(shuō),對(duì)于需要消化傳代的細(xì)胞,每一次的消化都是對(duì)這個(gè)細(xì)胞存活與否,狀態(tài)好與不好zui至關(guān)重要的考驗(yàn)。
很多人都遇到過(guò)這個(gè)問(wèn)題,自己養(yǎng)的細(xì)胞開始的幾代長(zhǎng)的還挺好的,可是穿過(guò)幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細(xì)胞不行了,狀態(tài)越來(lái)越差勁了。對(duì)于這個(gè)問(wèn)題,可以非??隙ǖ卣f(shuō),你的消化環(huán)節(jié)出問(wèn)題了。你每一次的消化都讓細(xì)胞受到較大損傷了。所以,越長(zhǎng)越差。
在消化的過(guò)程中,你加入胰酶后,所有細(xì)胞都在被胰酶消化著,但是我們忽視了一個(gè)問(wèn)題就是,細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)是不一樣的,每一個(gè)細(xì)胞的貼壁情況也是不一樣的,有的貼壁牢固,有的貼壁沒有那么牢固的,所以,讓所有的細(xì)胞消化同樣的時(shí)間對(duì)細(xì)胞是不公平的,他們受到了差別待遇當(dāng)然會(huì)有脾氣啊。。。。,后來(lái)對(duì)消化的方法進(jìn)行了改良。爭(zhēng)取做到因材施教。稱之為“四步消化法"。(以難消化細(xì)胞為例)xy-4901R Annexin A7膜粘連蛋白7抗體
xy-9823R C3orf153號(hào)染色體開放閱讀框15抗體
xy-6336R APOB48R載脂蛋白B受體抗體
xy-6332R ABCA2三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體
xy-6333R ApoB 載脂蛋白B抗體
xy-6335R ALOX15B花生四烯酸15脂氧合酶2抗體
xy-6338R APOC4載脂蛋白C4抗體
xy-6337R ARH低密度脂蛋白受體銜接蛋白抗體
xy-7550R AUP1原始廣泛存在蛋白1抗體
xy-9398R ANKRD37錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白37抗體
xy-7588R A4GALTα1,4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶1
xy-7642R AGTRAP血管緊張素Ⅱ受體相關(guān)蛋白抗體
xy-7669R AX2R膜粘連蛋白2受體抗體
xy-0203R ACEI血管緊張素1轉(zhuǎn)換酶抑制劑抗體
xy-1229R AATF拮抗凋亡轉(zhuǎn)錄因子抗體
xy-0094R AACT-Alpha1α-1抗胰糜蛋白酶抗體
xy-0096R alpha 1 Antitrypsinα-1抗胰蛋白酶抗體
xy-1224R ABCB6ATP結(jié)合蛋白家族6抗體
xy-1231R ABCG1三磷酸腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗體
xy-0611R Adiponectin receptor 2脂聯(lián)素受體2抗體
xy-9741R ANGEL1ANGEL1蛋白抗體
xy-9742R ANGEL2ANGEL2蛋白抗體
xy-9743R ANKLE2ANKLE2蛋白抗體
xy-9744R ANKMY1睪丸特異性錨樣蛋白1抗體
xy-9745R ANKRD13B錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白13B抗體
xy-9746R ANKRD20A1錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A1抗體
xy-9747R ANKRD20A3錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A3抗體
xy-9748R ANKRD22錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白22抗體
xy-9751R ANKRD50錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白50抗體
xy-9753R ATP6V1G2氫離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP合成酶6G抗體
xy-9755R ANKRD26錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體
xy-9756R ANKRD26錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體
xy-0728R ACY3丙型肝炎病毒核結(jié)合蛋白-1抗體