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免疫組化，全稱(chēng)是免疫組織化學(xué)，又稱(chēng)免疫細(xì)胞化學(xué)，是組織化學(xué)的一個(gè)分支。免疫組化是用標(biāo)記的特異性抗體（或抗原）對(duì)組織內(nèi)抗原（或抗體）的分布進(jìn)行組織和細(xì)胞原位檢測(cè)技術(shù)。
免疫組織化學(xué)利用抗體和抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性這一原理。先將組織或細(xì)胞中的某種化學(xué)物質(zhì)提取出來(lái)，以此作為抗原或半抗原，通過(guò)免疫動(dòng)物后獲得特異性的抗體，再以此抗體去探測(cè)組織或細(xì)胞中的同類(lèi)的抗原物質(zhì)。由于抗原與抗體的復(fù)合物是無(wú)色的，因此還必須借助于組織化學(xué)的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯示出來(lái)，以其達(dá)到對(duì)組織或細(xì)胞中的未知抗原進(jìn)行定性，定位或定量的研究。
免疫組織化學(xué)技術(shù)按照標(biāo)記物的種類(lèi)可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。
這些常用免疫組織化學(xué)方法的原理如下：
1. 免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)
免疫酶標(biāo)方法是繼免疫熒光后，于60年代發(fā)展起來(lái)的技術(shù)。是目前免疫組織化學(xué)研究中最常用的技術(shù)．基本原理是先以酶標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過(guò)光鏡或電鏡，對(duì)細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原進(jìn)行定位或定性研究。
免疫酶標(biāo)方法與免疫熒光技術(shù)相比的主要優(yōu)點(diǎn)是：定位準(zhǔn)確，對(duì)比度好，染色標(biāo)本可長(zhǎng)期保存，適合于光、電鏡研究等。免疫酶標(biāo)方法的發(fā)展非常迅速，已經(jīng)衍生出了多種標(biāo)記方法，且隨著方法的不斷改進(jìn)和創(chuàng)新，其特異性和靈敏度都在不斷提高，使用也越來(lái)越方便。目前在病理診斷中廣為使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法檢測(cè)系統(tǒng)等。
2. 免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)
將已知抗體標(biāo)上熒光素,以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后會(huì)發(fā)出一定波長(zhǎng)的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量。由于免疫熒光技術(shù)特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡(jiǎn)便，所以在臨床病理診斷、檢驗(yàn)中應(yīng)用較廣。
3. 免疫膠體金技術(shù)
就是用膠體金標(biāo)記一抗，二抗或其他的能特異性的結(jié)合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作為探針對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性，定位或定量研究．由于膠體金的電子密度高，多用于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記的定位研究。
1. 切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復(fù)，可在此步后進(jìn)行
2.緩沖液洗 3min/2 次。
3. 為了降低內(nèi)源性過(guò)氧化物酶造成的非特異性背景染色，將切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分鐘。
4. 緩沖液洗 5min/2 次。
5. 滴加 Ultra V Block ， 在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。
(注:孵育不要超過(guò) 10 分鐘，否則會(huì)導(dǎo)致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有 5 - 10% 正常羊血清，這一步可以省略。)
6. 緩沖液洗 5min/2 次。
7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小時(shí)。(具體孵育時(shí)間和溫度由試驗(yàn)者最終決定)
8. 緩沖液洗 5min/2 次。
9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer(增強(qiáng)子)，在室溫下孵育 20 分鐘。
10 .緩沖液洗 5min/2 次。
11 .滴加 HRP Polymer(酶標(biāo)二抗) ，在室溫下孵育 30 分鐘。
(注:HRP Polymer 對(duì)光敏感，應(yīng)避免不必要的光暴露并儲(chǔ)存在不透明的小瓶中。)
12 .緩沖液洗 5min/2 次。
13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen)，混勻后滴加到切片上，孵育 3 - 15 分鐘。(具體時(shí)間由染色深淺決定。)
14 .自來(lái)水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明，封片。
免疫組化結(jié)果分析
采用半定量方法判定蛋白的表達(dá)等級(jí)。具體來(lái)說(shuō)，即分別對(duì)鏡下陽(yáng)性細(xì)胞的百分比和染色強(qiáng)度給予評(píng)分；陽(yáng)性細(xì)胞百分比：0％計(jì)為0分，1％～25％計(jì)為1分，26％～50％計(jì)為2分，51％～75％計(jì)為3分，76％～100％計(jì)為4分；陽(yáng)性著色強(qiáng)度：無(wú)色計(jì)為0分，淡黃色計(jì)為1分，棕黃色計(jì)為2分，棕褐色計(jì)為3分。兩者計(jì)分相乘即為表達(dá)等級(jí)：0-4分為低表達(dá)，5-12分為高表達(dá)。
免疫組織化學(xué)的臨床應(yīng)用主要包括以下幾方面： (1)惡性腫瘤的診斷與鑒別診斷； (2)確定轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤的原發(fā)部位； (3)對(duì)某類(lèi)腫瘤進(jìn)行進(jìn)一步的病理分型； （4）軟組織腫瘤的治療一般需根據(jù)正確的組織學(xué)分類(lèi)，因其種類(lèi)多、組織形態(tài)相像，有時(shí)難以區(qū)分其組織來(lái)源，應(yīng)用多種標(biāo)志進(jìn)行免疫組化研究對(duì)軟組織腫瘤的診斷是不可缺少的； （5）發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶，有助于臨床治療方案的確定，包括手術(shù)范圍的確定。 （6）為臨床提供治療方案的選擇。
