亚洲欧美日本韩国_久久久久亚洲AV片无码V_亚洲AV片不卡无码一_H漫全彩纯肉无码网站

 
 
當前位置: 首頁 » 新聞資訊 » 廠商 » 正文

如何實時監(jiān)測小鼠腫瘤——中國生物器材網(wǎng)

分享到:
放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2019-08-21  來源:儀器信息網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):816
上一期我們詳細介紹了皮下荷瘤的測量和計算方法,但是卡尺測量存在很大局限性,如對于原位或者轉(zhuǎn)移腫瘤模型,是無法適用的。由此,一種名為IVIS的高效檢測系統(tǒng)應運而生,可以實時追蹤小鼠體內(nèi)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。本期我們就為大家介紹一下:基于Luciferase 的IVIS生物發(fā)光成像系統(tǒng)在腫瘤檢測中的應用及操作手法。

什么是(IVIS, in vivo Imaging system)

IVIS即小動物活體成像體統(tǒng),通過一套非常靈敏的光學檢測儀器,主要基于生物發(fā)光(Luc等標記)或熒光(GFP等標記)原理直接監(jiān)控活體動物體內(nèi)組織、細胞或分子等行為。

如下圖:左:IVIS Lumina III 小動物活體成像系統(tǒng),包括一個高度靈敏的CCD相機及成像暗箱和成像軟件,右:對應荷瘤小鼠放置暗箱后的原理圖。

IVIS Lumina III成像系統(tǒng)(來自PerkinElmer) Luc-細胞的活體成像模式圖[1]

IVIS主要包括生物發(fā)光或熒光原理,在腫瘤研究中基于生物發(fā)光的熒光素酶(Luciferase, Luc)基因標記細胞,更為常用。

為什么腫瘤研究主要用Luc標記的生物發(fā)光呢?

主要在于生物發(fā)光可獲得更加真實可靠的數(shù)據(jù)。熒光信號雖遠遠強于生物發(fā)光,但非特異性熒光產(chǎn)生的背景噪音使其信噪比遠遠低于生物發(fā)光。這些背景噪音造成熒光成像的靈敏度較低。從目前發(fā)表的高水平文章來看,大部分還是應用生物發(fā)光的方法來研究活體動物體內(nèi)成像。下面我們就具體介紹。

基于生物發(fā)光的IVIS監(jiān)測腫瘤的優(yōu)勢

1. 能夠?qū)崟r監(jiān)測腫瘤生長和轉(zhuǎn)移

我們知道卡尺測量只限于皮下腫瘤,無法監(jiān)測體內(nèi)原位或轉(zhuǎn)移腫瘤。最傳統(tǒng)的方法即一次性獲得很多荷瘤小鼠,每一階段處死一批,取出小鼠體內(nèi)腫瘤獲得統(tǒng)計數(shù)據(jù)。這明顯是很愚笨低效的辦法。而IVIS可以長時間并階段性地、無創(chuàng)傷地定量檢測小鼠原位瘤、轉(zhuǎn)移瘤及自發(fā)瘤。

如下圖:熒光標記的人乳腺癌細胞株MDA-MB231-luc,注射到小鼠第四對乳房墊,構(gòu)建乳腺癌原位模型。利用IVIS可以每隔幾天對小鼠體內(nèi)腫瘤進行觀察和統(tǒng)計。

MDA-MB231-luc在裸鼠體內(nèi)成像圖[2]

2. IVIS相比皮下測量,更加靈敏

如卡尺測量是當腫瘤組織長到綠豆大小才開始統(tǒng)計,對于之前這段時間,我們的信息是空白的,如細胞是否生長或者壞死;又如,當腫瘤組織長到一定階段,盡管體積未變化,但是腫瘤細胞已出現(xiàn)了壞死[3]。

如下圖:輝瑞上市的抗癌藥物Sutent,卡尺測量發(fā)現(xiàn)藥物處理組的PC-3M-Luc 皮下腫瘤體積仍在緩慢生長,但IVIS卻發(fā)現(xiàn),藥物組光學信號顯著降低,即表明細胞已經(jīng)死亡。IVIS結(jié)果,使得輝瑞順利通過FDA認證[4]。

輝瑞上市藥物Sutent的臨床前結(jié)果[4]

綜上所述,IVIS因可獲取更加準確直觀的結(jié)果,且操作簡單快捷,盡管才發(fā)展幾年,但已廣泛用于抗腫瘤藥物研發(fā)及腫瘤機理研究。下面就一起來學習一下IVIS系統(tǒng)的操作。

如何用IVIS進行腫瘤監(jiān)測

小動物活體成像,基本原理是利用軟件及成像系統(tǒng),將Luc標記的細胞在小鼠體內(nèi)荷瘤,當給小鼠注射底物熒光素(luciferin)時,熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,氧化過程中會發(fā)出生物熒光,幾分鐘內(nèi)就可獲得統(tǒng)計數(shù)據(jù)。

基本步驟如下圖:

Luc標記的IVIS操作步驟

注意事項:


底物濃度一般為150mg/kg; 如一只8周雄性裸鼠約20g,那么一只小鼠需要3mg底物;一般用無菌PBS溶解。


在使用軟件時,成像前需要設置軟件的多個參數(shù),如小鼠成像時間(3-5min)、熒光最大值及最小值、溫度及建立不同組的文件夾等。


詳細操作步驟可以參考JOVE的視頻地址:https://www.jove.com/video/1210/

常見問題解答

1. 一般細胞注射多久,可以上機成像?

一般在注射細胞30分鐘后利用IVIS監(jiān)測細胞位置及數(shù)量,并且馬上進行分組。

2. 剛注射的Luc細胞,IVIS上看不到發(fā)光圖片,有哪些原因?

考慮Luc細胞本身問題;機器參數(shù)設置是否有問題,如我們可以在軟件上設置熒光最大值和最小值的范圍,若最小值較大,會造成看不到發(fā)光圖片。

3. 注射的Luc細胞,多久之內(nèi)可以觀察成像?

熒光素脂溶性非常好, 很容易透過血腦屏障。一般腹腔注射10min后,即可麻醉后上機;一次熒光素能保持小鼠體內(nèi)熒光素酶標記的細胞發(fā)光30-45min,所以操作盡快完成。

數(shù)據(jù)分析及應用

1. 抗腫瘤藥物研發(fā)

如上圖中輝瑞上市的抗癌藥物Sutent,通過IVIS可以直接快速地測量腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移,從而實時觀測和評估藥物的效果。

2. 也可以用于癌癥分子機理的研究

將癌癥相關的目的基因和熒光素酶標記,整合一起構(gòu)建共表達載體,通過發(fā)光信號,反應基因表達情況,進而推測基因與腫瘤發(fā)展的關系。

如下圖:研究者將一個熒光素酶基因質(zhì)粒與帶有致癌基因ras、四環(huán)素反式激活因子tTA (tet-off)及四環(huán)素依賴性p53 shRNA的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體共轉(zhuǎn)染成肝細胞后,接種于小鼠肝臟。結(jié)果顯示,當p53的表達被shRNA抑制時,生物發(fā)光觀測到的腫瘤信號逐漸增強;當用強力霉素誘導表達后,信號減弱,進而說明p53的表達能夠抑制腫瘤的生長[5]。

IVIS觀測p53基因表達下降或上升對于肝癌發(fā)生的作用 [5]

IVIS由于能夠?qū)崟r追蹤腫瘤在體內(nèi)的位置及生長情況,并且快捷地提供準確的數(shù)據(jù),已應用于腫瘤研究多個領域。所以這是一項非常重要的監(jiān)測手段。希望看了我們的文章,能給你帶來幫助。有任何問題,歡迎留言討論!

參考文獻

[1] https://www.jove.com/video/1210/

[2] Zhang T, Chen Y, Li J, et al. Antitumor action of a novel histone deacetylase inhibitor, YF479, in breast cancer.[J]. Neoplasia, 2014, 16(8): 665-677.

[3] Lim, E., Modi, K.D., Kim, J. In vivo Bioluminescent Imaging of Mammary Tumors Using IVIS Spectrum. J. Vis. Exp. (26), e1210, doi:10.3791/1210 (2009).

[4] Mendel DB, Laird AD, Xin X, et al. In vivo antitumor activity of SU11248, a novel tyrosine kinase inhibitor targeting vascular endothelial growth factor and platelet-derived growth factor receptors: determination of a pharmacokinetic/pharmacodynamic relationship. Clin Cancer Res. January 2003;9(1):327-337.

[5] Xue W, Zender L, Miething C, et al. Senescence and tumour clearance is triggered by p53 restoration in murine liver carcinomas[J]. Nature, 2007, 445(7128): 656-660.

 
 
打賞
[ 新聞資訊搜索 ]  [ 加入收藏 ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 違規(guī)舉報 ]  [ 關閉窗口 ]
免責聲明:
本網(wǎng)站部分內(nèi)容來源于合作媒體、企業(yè)機構(gòu)、網(wǎng)友提供和互聯(lián)網(wǎng)的公開資料等,僅供參考。本網(wǎng)站對站內(nèi)所有資訊的內(nèi)容、觀點保持中立,不對內(nèi)容的準確性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保證。如果有侵權(quán)等問題,請及時聯(lián)系我們,我們將在收到通知后第一時間妥善處理該部分內(nèi)容。
 

如何實時監(jiān)測小鼠腫瘤——中國生物器材網(wǎng)二維碼

掃掃二維碼用手機關注本條新聞報道也可關注本站官方微信賬號:"xxxxx",每日獲得互聯(lián)網(wǎng)最前沿資訊,熱點產(chǎn)品深度分析!
 

 
0相關評論

 
亚洲 日本 欧美 中文幕| 香港台湾经典三级a视频| 99精品久久99久久久久| 成人欧美一区二区三区黑人免费| 国产精品一区二区 尿失禁| 欧美国产日本高清不卡| 久久久久亚洲av无码专区网站| 18女下面流水不遮图| 天天色影网| 久久露脸国产精品| 久久精品成人无码观看不卡| 国产激情视频一区二区三区| 免费操逼视频| 欧美人妻日韩精品| a级毛片免费完整视频| 久久久久久人妻一区精品| 97精品一区二区视频在线观看| 国产女人高潮叫床视频| 高清破外女出血av毛片| 成av免费大片黄在线观看| 东北寡妇特级毛片免费| 无码国产色欲xxxxx视频| 亚洲av无码一区二区二三区| 日本免费人成视频播放| 最新亚洲av日韩av二区| 午夜视频体内射.com.com| 日韩无码电影| 亚洲精品无码av专区最新| 人妻夜夜爽天天爽三区丁香花| 男人添女人囗交做爰视频| 99无码精品二区在线视频| 一本一道av无码中文字幕麻豆| 久久久亚洲精品无码| 欧美黑人性暴力猛交喷水黑人巨大 | 亚洲色欲色欲综合网站| 国产成人无码一区二区在线观看 | a级大胆欧美人体大胆666| 国产欧美日韩精品a在线观看| 精品无码国产污污污免费网站| 国内精品乱码卡一卡2卡三卡| 日本妈妈在线观看中文字幕|