檢測儀器:島津 PPSQ-31A 蛋白多肽自動測序儀
一、 蛋白質(zhì)N端測序的主要應(yīng)用:
1.樣品:蛋白質(zhì),多肽樣品的氨基酸序列測定
2.優(yōu)勢:能連續(xù)測定 60 個以上的氨基酸序列
3.來源:天然提取(動物/植物/微生物);合成多肽;重組蛋白等
二、 樣品要求:
1.純度: 95(基于摩爾數(shù))
2.含量:50-100pmol(液體體積控制在 20ul)
3.修飾封閉:N 端未被封閉
4.樣品形式:液體;干粉;PVDF 膜
5.無干擾物:蛋白酶;氨基酸;胺;鹽分;乙醛;去污劑等
三、 客戶提供信息:
1.純度:純度檢測結(jié)果及圖譜信息
2.修飾:樣品可能修飾情況
3.制備方法:如 SDS,HPLC 及其它方式
4.驗證目的:提供理論序列
5.表觀分子量
其它注意事項:
1.郵寄要求:使用干冰冷凍保護
2.液體樣品:
可用溶劑:蒸餾水、TFA 水溶液、醋酸水溶液、乙氰水溶液以及三甲基胺水溶液。
不可用的溶劑:氨鹽、Tris 等,含有 1 級、2 級胺的鹽溶液,含有 SDS 的溶液
3.固體樣品:
干燥處理的樣品,請先確認(rèn)干燥處理前的溶劑中不含有上述不兼容的溶劑。如果含有不兼容的溶劑時,請告知我方檢測人員。
4.PVDF 膜:注意以下方面
1)樣品量:5-8 條泳道,每條泳道的樣品盡量用最高濃度樣品,上最大體積(盡量使條帶長胖為正常的 2-3 倍寬度)
2)硝酸纖維素膜:具有耐藥性,不能使用。
3)在電轉(zhuǎn)印中使用的緩沖液盡可能不含甘氨酸。在使用了含甘氨酸的緩沖液時,請告知我方檢測人員。
4)染色劑推薦使用考馬斯亮藍(CBB-R250)。
5)推薦使用下列的 PVDF 膜:
一、 蛋白質(zhì)N端測序的主要應(yīng)用:
1.樣品:蛋白質(zhì),多肽樣品的氨基酸序列測定
2.優(yōu)勢:能連續(xù)測定 60 個以上的氨基酸序列
3.來源:天然提取(動物/植物/微生物);合成多肽;重組蛋白等
二、 樣品要求:
1.純度: 95(基于摩爾數(shù))
2.含量:50-100pmol(液體體積控制在 20ul)
3.修飾封閉:N 端未被封閉
4.樣品形式:液體;干粉;PVDF 膜
5.無干擾物:蛋白酶;氨基酸;胺;鹽分;乙醛;去污劑等
三、 客戶提供信息:
1.純度:純度檢測結(jié)果及圖譜信息
2.修飾:樣品可能修飾情況
3.制備方法:如 SDS,HPLC 及其它方式
4.驗證目的:提供理論序列
5.表觀分子量
其它注意事項:
1.郵寄要求:使用干冰冷凍保護
2.液體樣品:
可用溶劑:蒸餾水、TFA 水溶液、醋酸水溶液、乙氰水溶液以及三甲基胺水溶液。
不可用的溶劑:氨鹽、Tris 等,含有 1 級、2 級胺的鹽溶液,含有 SDS 的溶液
3.固體樣品:
干燥處理的樣品,請先確認(rèn)干燥處理前的溶劑中不含有上述不兼容的溶劑。如果含有不兼容的溶劑時,請告知我方檢測人員。
4.PVDF 膜:注意以下方面
1)樣品量:5-8 條泳道,每條泳道的樣品盡量用最高濃度樣品,上最大體積(盡量使條帶長胖為正常的 2-3 倍寬度)
2)硝酸纖維素膜:具有耐藥性,不能使用。
3)在電轉(zhuǎn)印中使用的緩沖液盡可能不含甘氨酸。在使用了含甘氨酸的緩沖液時,請告知我方檢測人員。
4)染色劑推薦使用考馬斯亮藍(CBB-R250)。
5)推薦使用下列的 PVDF 膜: