高圖像質(zhì)量光學(xué)顯微鏡常識-光源到物鏡二維圖像

  當(dāng)透射光線到達(dá)檢測器時，彩色的電子束分裂器將激發(fā)光線反射
至樣本。光源到物鏡的光路和物鏡到檢測孔的光路本質(zhì)上是一樣的。

  因此。照明和檢測孔都聚焦在樣本上的照明點，這就是為什么把
該系統(tǒng)叫做“共焦”。由于被檢測的信號通常十分微弱，使用的檢測
器是一個光電倍增管。

  共聚焦系統(tǒng)中，一次只能觀察一個點。因此，為了形成一個圖像。

  那個點必須被掃描。

  同時記錄測試到的強度。這通常依靠兩個鏡子掃描光束來實現(xiàn)，
叫做共焦激光掃描顯微鏡方法（confoeal laser seanning mieroseopy，
CLSM）。

  測試到的強度被記錄并且在一個主機上顯示出來，掃描系統(tǒng)也是
靠主機驅(qū)動的。獲得的所有沿軸向的薄區(qū)域很大程度上已經(jīng)沒有了非
聚焦光線，這種效果叫做光學(xué)斷層，然后，沿Z 軸重復(fù)掃描X 一Y 平
面就可以獲得可供分析的三維圖像。

  單個平面在所有Z 區(qū)域的投影都會得到一個二維圖像，與常規(guī)顯
微術(shù)不同的是，CLSM得到的僅是聚焦區(qū)域的信息，因此較大的場深是
通過疊加非常薄的聚焦區(qū)域得到的。

  要采集到最好的圖像，必須結(jié)合以下三個因索：激光強度、共聚
焦孔的尺寸和放大器的增益。增加任何一個因素的參數(shù)都會使圖像更
明亮，但是會損害圖像質(zhì)量。如分辨率降低、信噪比降低或者使圖像
漂白。

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