熒光顯微鏡
熒光顯微鏡可用來估算微生物群體密度和生存能力,其原理為:
某些分子能吸收特定波長的光,并釋放出不同波長的光(即熒光),
能夠在熒光顯微鏡下被觀察到。
自然界有些物質(zhì)(如葉綠素)能夠產(chǎn)生熒光,人工合成的某些物
質(zhì)(如熒光團(tuán))也能產(chǎn)生熒光。熒光基團(tuán)吸收藍(lán)色光形成激發(fā)態(tài),激
發(fā)態(tài)電子迅速釋放出多余的能量而返回到基態(tài)。
當(dāng)電子釋放能量回到基態(tài)時,釋放出的綠色光能量較低,且波長
較藍(lán)色光長。
然而,有些熒光基團(tuán)能吸收綠色光而激發(fā)出能量更低、波長更長
的紅色光。
在熒光顯微技術(shù)中,特定的染色劑被細(xì)胞直接吸收,或者與細(xì)胞
中的有機(jī)物發(fā)生化學(xué)反應(yīng),或者被特定的亞細(xì)胞器富集。免疫化學(xué)技
術(shù)也經(jīng)常被應(yīng)用于熒光顯微技術(shù),
因?yàn)闊晒馊玖峡梢耘c活細(xì)胞膜中某些部位發(fā)生特異反應(yīng),所以利
用熒光顯微鏡技術(shù)可以區(qū)分活細(xì)胞與死細(xì)胞?!按婊畹珶o法培養(yǎng)(VBNC)”
的細(xì)胞在標(biāo)準(zhǔn)微生物培養(yǎng)基上無法生長,可用熒光顯微技術(shù)進(jìn)行觀察。
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