熒光技術(shù)在顯微鏡的應(yīng)用-熒光光譜的的原理

物質(zhì)受紫外光照射時發(fā)出各種顏色和不同強(qiáng)度的可見
光，但當(dāng)紫外光停止照射，光又隨之消失，這種光叫做熒
光。熒光分析法是用熒光分光光度計測出與熒光物質(zhì)濃度成
線性關(guān)系的熒光強(qiáng)度的一種分析方法。

吸收光譜與熒光光譜

  讓不同波長的紫外光照射熒光物質(zhì)溶液，測其相應(yīng)吸光
度，用吸光度對波長繪制的曲線即熒光物質(zhì)的吸收光譜。熒
光分析中所用的激發(fā)光是該物質(zhì)吸收光譜中某個吸收峰所在
波長的光。當(dāng)激發(fā)光的波長和強(qiáng)度保持不變，轉(zhuǎn)動單色器在
不同波長下測定熒光物質(zhì)所發(fā)出的熒光強(qiáng)度，以熒光強(qiáng)度對
波長作圖，則得該物質(zhì)的熒光光譜。熒光物質(zhì)的吸收光譜與
熒光光譜存在著“鏡象對稱”關(guān)系

物質(zhì)發(fā)生熒光，主要決定于其結(jié)構(gòu)，其次是要有高的熒
光效率。熒光效率是發(fā)出熒光的量子數(shù)與吸收激發(fā)光的量子
數(shù)之比。許多吸光物質(zhì)并不發(fā)生熒光，就是由于它們的熒光
效率低，而將所吸收的能量消耗予與溶劑分子或其他溶質(zhì)分
子之間的相互碰撞的緣故。

影響熒光強(qiáng)度的因素：
  1．同一種熒光物質(zhì)在不同溶劑中熒光光譜位置和強(qiáng)度要
發(fā)生變化。一般熒光峰波長隨溶劑介電常數(shù)的增大而增大：
熒光強(qiáng)度隨溶劑增大而增強(qiáng)。

  2．溫度對溶液的熒光強(qiáng)度有明顯影響。一般溫度降低熒
光效率升高，熒光強(qiáng)度增大。因溫度降低，介質(zhì)的粘度逐漸
增大，熒光物質(zhì)分子與溶劑分子的碰撞也隨之減弱的緣故。’
可見低溫?zé)晒夥治隹纱蟠筇岣哽`敏度。

  3．有些熒光物質(zhì)在激發(fā)光長時間照射下，容易發(fā)生光
解，從而使熒光降低。為此測定時應(yīng)盡量縮短照射時間。
  4．溶液的PH對熒光強(qiáng)度有顯著影響。熒光物質(zhì)往往是
弱有機(jī)酸或有機(jī)鹼，其分子量負(fù)離子經(jīng)常是結(jié)構(gòu)不同的互變
異構(gòu)體，其中一個常是非熒光物質(zhì)。

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