熒光分光光度計(jì)

熒光分光光度計(jì)亦由光源，單色器、液槽和受光器組
成。與分光光度計(jì)不同，它有兩個(gè)單色器，一為激發(fā)光單色器，

一為熒光單色器

高壓汞燈在使用過程中不可關(guān)閉電源，如在使用過程中汞燈熄滅，必須等待
汞燈完全冷卻后，才可以重新接上電源。

氙弧燈所發(fā)出的光強(qiáng)度大，且是連續(xù)譜線，包括
250—700nm光域。而且在300—400nm整個(gè)波段內(nèi)，所有的
射線強(qiáng)度幾乎相等。

  2．單色器：在熒光分光光度計(jì)中液槽前裝一個(gè)單色器，
以得到一定波長的激發(fā)光，在液槽底部恰好與前一單色器垂
直方向另裝一個(gè)單色器以得到一定波長的熒光。單色器用光
柵或石英棱鏡做成，光柵造價(jià)低而靈敏度高。
  3．受光器：熒光分光光度計(jì)需用光電培增管為受光器，因
通過光柵或棱鏡的單波長熒光很弱，硒光電池難以測量。
  4．液槽：熒光計(jì)中液槽要用低熒光材料制成，通常用石
英。液槽形狀以正方形或長方形為宜。因?yàn)檫@類形狀的液槽散
射光的干擾較小。低溫?zé)晒夥治鏊靡翰凼窃谑⒁翰壑?br>套上一個(gè)盛液氮的透明的石英外殼。

  5．熒光分光光度計(jì)的光學(xué)系統(tǒng)：

熒光分光光度計(jì)的光學(xué)系統(tǒng)。該儀器激發(fā)光單色器和熒光
單色器都采用雙色單色器，以提高分辨本領(lǐng)和降低散射光的
干擾。該儀器的激發(fā)光單色器系用一個(gè)石英棱鏡配上一個(gè)光
柵，熒光單色器則采用兩個(gè)光柵。光柵刻線均為600條／毫
米。激發(fā)光單色器及熒光單色器的分辨率為0．5和0．2nm，色
散分別為7．5及2.7．nm／mm。光源為500氙燈，用濾光片濾
去在200—800nm區(qū)的高次反射光。

熒光分析的工作方法

  一、標(biāo)準(zhǔn)曲線法：用一系列熒光物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液在一定
條件下測其熒光強(qiáng)度，然后以熒光強(qiáng)度對濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲
線。在相同條件下測定試液的熒光強(qiáng)度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線找出試
液熒光物質(zhì)的濃度。

  繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，需用標(biāo)準(zhǔn)系列中濃度最大者為基準(zhǔn)校
準(zhǔn)熒光強(qiáng)度為100，用空白溶液調(diào)節(jié)讀數(shù)為零。為了使不同時(shí)
間所繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線一致，每次均采用同一基準(zhǔn)镕液進(jìn)行校
準(zhǔn)。

  二、差示法：在分光光度法中當(dāng)試液濃度太大吸光度讀
數(shù)高于0．8時(shí)，必須采用差示法。所謂差示法就是配制一系
列標(biāo)準(zhǔn)溶液并把試液濃度包括在其中。用一個(gè)濃度最小的標(biāo)
準(zhǔn)溶液，  (相當(dāng)于平時(shí)的空白溶液)將儀表讀數(shù)調(diào)至100，以
濃度最小的標(biāo)準(zhǔn)溶液為原點(diǎn)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后測量試液
的吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線找出試液濃度。
  在差示熒光法中，則是先用一個(gè)比試液熒光強(qiáng)度較小的
標(biāo)準(zhǔn)溶液(例如濃度為1微克／毫升)調(diào)節(jié)熒光強(qiáng)度讀數(shù)為
0，再用另一熒光強(qiáng)度比試液大的標(biāo)準(zhǔn)溶液(例如濃度為
2微克／毫升)調(diào)節(jié)熒光強(qiáng)度讀數(shù)為100。這樣可使測定在
1—2微克／毫升下進(jìn)行。 

(本文由上海光學(xué)儀器廠編輯整理提供, 未經(jīng)允許禁止復(fù)制http://www.sgaaa.com)