熒光顯微鏡檢基本技術,動物細胞涂片檢測儀器

  熒光顯微鏡檢術用于兩種基本的技術，即直接FA法和間接FA法
。直接法是將待檢的材料涂片固定，用含有特異抗體的結(jié)合球蛋白
試劑浸漬。將浸滿試劑的涂片放在溫室內(nèi)在37℃培育30—60min。
然后將涂片洗兩次，第一次用緩沖生理鹽水洗5一lOmin。再用自來
水洗5一lOmin，將沒有結(jié)合的球蛋白全部洗去。滴一滴緩沖甘油于
涂片上，加蓋無熒光的蓋玻片。涂片即可用熒光顯微鏡檢查。

  間接法是將涂片先用未標記的抗血清處理，這稱為初次結(jié)合作
用。操作方式與直接法完全一樣。涂片經(jīng)培育與洗滌之后，加初次
反應所用同源動物的血清球蛋白用熒光素標記的抗球蛋白抗體。涂
片再培育和洗滌，熒光素顯示抗原與初次反應使用未標記特異抗體
之間反應情況。如抗原與特異抗體未發(fā)生結(jié)合，則隨后加的熒光素
標記的抗球蛋白，因沒有和特異抗體的球蛋白結(jié)合而不產(chǎn)生熒光。

  間接法的優(yōu)點是需用標記抗血清的量較少。如果所有診斷用抗
血清都是用單獨一種動物——例如家兔生產(chǎn)的，則僅需要熒光素標
記的抗兔球蛋白抗體。這種血清是將兔球蛋白注射另一種動物制備
的。

  許多標記的抗血清如聽裝的抗兔球蛋白抗體和未標記的特異抗
血清都已有商品出售，鑒于生產(chǎn)標記抗血清比較復雜，而且花費時
間，可以購買成品使用。

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