DNA電子顯微鏡技術(shù)的應(yīng)用,精細(xì)菌體科研光學(xué)儀器

DNA的電子顯微鏡觀察

  與一般的手段不同，DNA的電子顯微鏡檢查是一種簡(jiǎn)
單、迅速而又可靠的技術(shù)。由于可以對(duì)單個(gè)分子進(jìn)行觀察，
并且所有的分子都可以觀察到，所以，它能很好地補(bǔ)充凝膠
電泳技術(shù)的不足。在凝膠電泳中，看到的是長(zhǎng)度相同的一群
分子。電鏡除了可用于DNA的一般觀察以外，還可進(jìn)行異
源雙鏈的檢查，從而確定非同源區(qū)的位置。

原理
用水樣法和醋酸鈾染色法觀察DNA。
這是一項(xiàng)非常快速的方法，當(dāng)需要用定性的方法確定
一個(gè)DNA樣品的分子大小或結(jié)構(gòu)拓樸學(xué)時(shí)非常有用。第二部
分將集中討論異源雙鏈的形成以及用甲酰胺法觀察異源雙
鏈。起初，可用噬菌體進(jìn)行異源雙鏈分析。后來(lái)，可以對(duì)實(shí)
驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的缺失進(jìn)行定位。

實(shí)驗(yàn)步驟
  1．演示檢查電子顯微鏡。
  2．按照實(shí)驗(yàn)方法二十七，在電鏡下觀察用水樣法制備的
DNA樣品。DNA應(yīng)事先準(zhǔn)備好。
  3．按照實(shí)驗(yàn)方法二十八在電鏡下觀察用甲酰胺法制備
的DNA樣品。用于異源雙鏈分析的噬菌體原液應(yīng)事先準(zhǔn)備
好。

  4．用最好的銅網(wǎng)樣品，攝下異源雙鏈的圖像。

  5．對(duì)感興趣的噬菌體進(jìn)行電子顯微鏡異源雙鏈分析

這是一個(gè)可靠的方法，但是需要較長(zhǎng)的離心時(shí)間。
污染的DNA、RNA和某些蛋白質(zhì)在16小時(shí)之內(nèi)不會(huì)達(dá)到平
衡，它們會(huì)分布于整個(gè)梯度。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是，噬菌體在
一個(gè)遠(yuǎn)沒(méi)有上述方法所用的那樣陡的梯度中即可到達(dá)平衡密
度。如果噬菌體制備物是不均一的，即噬菌體含有的DNA
大小不同，結(jié)果所觀察到的噬菌體帶就會(huì)不只一條。
  觀察·個(gè)微弱噬菌體帶的最好方法是，用一條來(lái)自于顯
微鏡光源的平行光，從離心管的上部照射下來(lái)。在離心管的r
背面放一個(gè)平的黑色背景也有利于觀察。

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