抗體文庫制備服務 人源抗體噬菌體展示文庫制備
噬菌體展示技術(phage displayed technology)是指利用共表達方式,將外源蛋白基因,如抗體片段、多肽片段等的cDNA連接在噬菌體表面結(jié)構(gòu)蛋白基因VIII或基因III上進行菌體外展示表達。該技術是由Smith,G.P在1985年提出,通過吸附-洗脫-擴增的重復過程,將含有靶蛋白噬菌體從表達各種外源蛋白的噬菌體庫中篩選出來,然后進行富集、擴增及基因序列測定,推斷外源蛋白的氨基酸組成。天然人源抗體是指收集未經(jīng)免疫的人源外周血淋巴單核細胞,進行一系列的基因克隆,將抗體的CDR區(qū)域克隆拼接到噬菌體衣殼蛋白基因上進行展示,通過重復吸附-洗脫-擴增等過程,將含有高特異性和高親和力抗體片段的噬菌體從噬菌體庫中篩選出來,然后進行富集、擴增及基因重組構(gòu)建單克隆抗體。
卡梅德生物擁有M13,T4和T7噬菌體展示體系,根據(jù)客戶的項目需求(展示的蛋白或抗體片段的大小等參數(shù)),會采用不同的噬菌體進行蛋白或者抗體的展示。在已完成的案例中,基于M13噬菌體pIII基因展示體系較為常用,構(gòu)建的庫容量可以達到1011,其中有效庫容量為109。同時,客戶也可以提供抗原,進行體外外周血淋巴單核細胞敏化,以獲得更高親和力和特異性的單克隆抗體,通常基于該方法制備的抗體親和力能達到10-13 M級別。
噬菌體抗體展示文庫平臺特征:
*可溶抗原的快速制備能力:結(jié)合公司現(xiàn)有的重組蛋白表達體系,我們能夠在短時間內(nèi)制備出高純度、高生物學活性的可溶抗原蛋白,用以支持噬菌體抗體的免疫及篩選工作。
*成熟穩(wěn)定的免疫文庫構(gòu)建技術:目前我們獲得的噬菌體一級免疫文庫的庫容可高達108 ~ 109,序列豐度超過99%,獲得的抗體親和力達到nM甚至pM級別。
*快速可靠的候選抗體篩選及初步鑒定技術:根據(jù)不同的抗體藥物功能需求,開發(fā)了多種篩選體系,包括直接篩選法、競爭法、負篩選發(fā)、細胞篩選法等。