色譜法

色譜法是許多純化方案的核心并擁有一些共同的特征。首先，目的
蛋白溶解在流動(dòng)相里，通常是緩沖水溶液中。溶液通常來(lái)源于細(xì)胞提取
物并且可以直接用于色譜分離。當(dāng)流動(dòng)相通過(guò)樹(shù)脂(固定相)時(shí)，根據(jù)蛋
白質(zhì)功能基團(tuán)及物理性質(zhì)的不同，固定相可以選擇性的吸附分子。物理
性質(zhì)包括電荷、分子質(zhì)量、疏水性和配體親和力。固定相的選擇與純化
的蛋白質(zhì)性質(zhì)密切相關(guān)。

色譜的基本原理是一根柱子，柱子中填充樹(shù)脂，上樣之前用緩沖液
來(lái)平衡樹(shù)脂。樣品進(jìn)入柱子，依賴(lài)蛋白質(zhì)和樹(shù)脂上的功能基團(tuán)之間的相
互作用的不同來(lái)分離。這些相互作用會(huì)降低一種或幾種蛋白質(zhì)通過(guò)柱子
的時(shí)間，而其他蛋白質(zhì)不受阻礙。這樣速度較快的通過(guò)柱子的蛋白質(zhì)就
和其他剩余的蛋白質(zhì)分離開(kāi)來(lái)。有些時(shí)候蛋白質(zhì)混合物與功能基團(tuán)的相
互作用不同，強(qiáng)的相互作用使其流過(guò)柱子的速度變慢，弱的相互作用使
其稍微快一些，而沒(méi)有相互作用使其流過(guò)樹(shù)脂毫無(wú)阻力。

蛋白質(zhì)溶液在流動(dòng)相和固定相之間平衡伴隨著溶液以階梯式從塔板
到塔板在柱子中流過(guò)。柱子的分辨率會(huì)隨著理論塔板數(shù)的增加而增加，
實(shí)際上，有很多增加理論塔板數(shù)的方法，如增加柱子的長(zhǎng)度，減小填料
顆粒的尺寸。增加分辨率的值是為了使兩種相似的流動(dòng)的溶質(zhì)以合理的
效率分開(kāi)。

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