從胞漿蛋白中分離膜囊泡

  實(shí)驗(yàn)中常常需要確定蛋白質(zhì)是定位于胞漿中還是胞膜上，除此
以外，在對(duì)透化處理的哺乳動(dòng)物細(xì)胞所進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)以及有囊泡出芽
形成參與的實(shí)驗(yàn)中，對(duì)膜和胞漿進(jìn)行分離也常常是很有必要的。將
膜與胞漿分離的策略包括使膜透過(guò)碘克沙醇阻滯液而從大密度樣品
中懸浮出來(lái)，此策略已擴(kuò)大用于真核生物和細(xì)菌。因?yàn)榈鞍走h(yuǎn)比膜
的密度大，它不會(huì)在梯度中漂浮而是會(huì)沉淀，所以此策略可以使二
者得到最大程度的分離。這種分離方法能避免從蔗糖梯度結(jié)果所得
出的任何含糊結(jié)論，因?yàn)樵谡崽翘荻戎杏捎诔两底饔煤蛿U(kuò)散作用，
膜沉淀和蛋白質(zhì)會(huì)慢速地向同一方向移動(dòng)。在碘克沙醇溶液中蛋白
質(zhì)與膜囊的密度之間的差異也會(huì)比在蔗糖溶液中大更多，主要是由
于碘克沙醇梯度具有更低滲透濃度。類似的方法也用于從高密度脂
蛋白中分離脂質(zhì)體。

  內(nèi)吞作用
  配體標(biāo)記

  在大多數(shù)情況下，對(duì)內(nèi)吞過(guò)程所進(jìn)行的跟蹤是通過(guò)配體來(lái)完成
的，配體可以使用放射性標(biāo)記，可以最終通過(guò)作用底物而檢測(cè)的共
價(jià)結(jié)合酶，或者膠體金來(lái)進(jìn)行確定。除非配體自身就很容易被確定
，否則對(duì)配體所進(jìn)行的這些修飾可能會(huì)改變它的化學(xué)行為，但這也
是很難避免的。這種方法的基本策略是將這些標(biāo)記的配體在短時(shí)間
內(nèi)注入組織或細(xì)胞，之后便可以對(duì)配體在不同胞內(nèi)部件的活動(dòng)進(jìn)行
跟蹤。

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