共聚焦顯微鏡,密度梯度常用于分析細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程

共聚焦顯微鏡，密度梯度經(jīng)常用于分析跨膜運(yùn)輸和細(xì)胞信號
轉(zhuǎn)導(dǎo)的過程。這些過程是與廣泛的細(xì)胞活動(dòng)相關(guān)的，例如分泌、生
物合成、內(nèi)吞作用和病毒處理。密度梯度不僅用于分級分離主要的
亞細(xì)胞器，如光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，也用于分離亞
區(qū)室、反式高爾基網(wǎng)絡(luò)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)一高爾基中間體、早期和晚期內(nèi)體
、轉(zhuǎn)運(yùn)和分泌小泡以及膜小凹和脂筏等質(zhì)膜結(jié)構(gòu)。這一細(xì)胞生物學(xué)
研究的豐富領(lǐng)域也包括蛋白從胞漿向膜的轉(zhuǎn)運(yùn)，這個(gè)過程可能發(fā)生
在細(xì)胞分化過程中。

常常用于梯度分析的上樣液是來自于簡單除細(xì)胞核的上清液，而不
是如輕線粒體沉淀或是微粒體那樣的已經(jīng)部分純化的成分。由于梯
度法不經(jīng)常用于純化一種特殊類型的膜，而是用于分析蛋白質(zhì)或其
他分子從一個(gè)區(qū)室到另一個(gè)區(qū)室的易位過程，更重要的考慮是沒有
任何潛在涉及的區(qū)室在梯度分離前的處理中丟失。像這樣簡單處理
的勻漿也可以減少實(shí)驗(yàn)所需的時(shí)間，并將操作次數(shù)減少到最小。
  許多年來，蔗糖梯度是用來分析這些膜區(qū)室的主要方法，這章
將會討論很多使用蔗糖作為介質(zhì)的成熟實(shí)驗(yàn)方案。然而碘化的密度
梯度介質(zhì)，特別是Nycodenz@和碘克沙醇也逐漸地被用來實(shí)現(xiàn)這一
目的，這一章也會給出許多使用這些梯度介質(zhì)的例子。與蔗糖相比
，這些介質(zhì)有許多優(yōu)點(diǎn)：作為密度介質(zhì)，它們?nèi)菀踪徺I到，也容易
配制梯度溶液，而且與相似密度的蔗糖相比，它們的摩爾滲透壓濃
度更低(特別是碘克沙醇溶液)，使得這些溶液的分辨能力比蔗糖溶
液的更高。

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