1、雙特性抗體簡介

雙特異性抗體（BsAb）又稱雙功能抗體，可同時識別和結(jié)合兩種不同的抗原和表位，并阻斷兩種不同的信號通路以發(fā)揮其作用。根據(jù)不同結(jié)構(gòu)可將雙特異性抗體結(jié)構(gòu)主要有2大類：含F(xiàn)c片段的雙特異性抗體（IgG-like雙特異性抗體）與不含F(xiàn)c片段的雙特異性抗體（non-IgG-like雙特異性抗體）。

IgG-like雙特異性抗體：IgG樣BsAb有Fc部分，具有Fc介導(dǎo)的效應(yīng)功能，如抗體依賴性細胞介導(dǎo)的細胞毒作用（ADCC）、補體依賴的細胞毒作用（CDC）和抗體依賴的細胞介導(dǎo)的細胞吞噬作用（ADCP）。分子量相對較大，其Fc部分有助于抗體后期的純化并提高其溶解性、穩(wěn)定性。IgG樣BsAb相對分子量較大，且Fc部分與受體FcRn結(jié)合，增加了抗體血清半衰期。此類抗體結(jié)構(gòu)主要包括Triomabs/quadroma、DVD-Ig（dual variable domain Ig）、CrossMAb、Two-in-one IgG、scFv2-Fc。

雙特異性抗體（BsAb）又稱雙功能抗體，可同時識別和結(jié)合兩種不同的抗原和表位，并阻斷兩種不同的信號通路以發(fā)揮其作用。根據(jù)不同結(jié)構(gòu)可將雙特異性抗體結(jié)構(gòu)主要有2大類：含F(xiàn)c片段的雙特異性抗體（IgG-like雙特異性抗體）與不含F(xiàn)c片段的雙特異性抗體（non-IgG-like雙特異性抗體）。

non-IgG-like雙特異性抗體：非IgG樣BsAb缺乏Fc片段，僅通過抗原結(jié)合力發(fā)揮治療作用，具有較低的免疫原性、易于生產(chǎn)、分子量小等特點。因相對分子量較小，其在腫瘤組織的滲透性較高，因此具有更強的治療效果。這些BsAb有諸多形式，主要包括TandAb（tandem diabody）、scFv-HSA-scFv、BiTE（bi-specific T-cell engager）、DART（dual affinity retargeting）、Nanobody。

2、雙特異性抗體的臨床優(yōu)勢

BsAb與普通抗體相比增加了一個特異性抗原結(jié)合位點，在治療方面表現(xiàn)出了以下優(yōu)勢：

√ 介導(dǎo)免疫細胞對腫瘤的殺傷：雙特異性抗體的一個重要作用機制是介導(dǎo)免疫細胞殺傷，雙特異性抗體有兩條抗原結(jié)合臂，其中一條與靶抗原結(jié)合，另一條與效應(yīng)細胞上的標記抗原結(jié)合，后者可以激活效應(yīng)細胞，使其靶向殺傷腫瘤細胞。目前已經(jīng)批準上市的2個雙特異性抗體產(chǎn)品都屬于這個類別，Trion Pharma公司開發(fā)的catumaxomab能夠靶向腫瘤表面抗原EpCAM和T細胞表面受體CD3，而Micromet公司和Amgen公司開發(fā)的Blinatumomab可以同時結(jié)合CD19和CD3。兩者都是通過激活并召集殺傷性T細胞，從而達到治療腫瘤的目的；

√?雙靶點信號阻斷，發(fā)揮獨特的或重疊的功能，有效防止耐藥：同時結(jié)合雙靶點，阻斷雙信號通路是雙特異性抗體的另一個重要作用機制。受體絡(luò)氨酸激酶（receptor tyrosine kinase，RTKs）是最大的一類酶聯(lián)受體，在細胞增殖過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，如Her家族等。RTKs在腫瘤細胞表面異常高表達，導(dǎo)致腫瘤細胞惡性增生，因此也是腫瘤治療的重要靶點。針對RTKs的單靶點單克隆抗體已在腫瘤治療中得到廣泛應(yīng)用，但是，腫瘤細胞可以通過轉(zhuǎn)換信號通路或通過HER家族成員自身或不同成員之間的同源或異源二聚體激活細胞內(nèi)信號進行免疫逃逸。因此采用雙特異性抗體藥物同時阻斷兩個或多個RTKs或其配體，可以減少腫瘤細胞逃逸，提高治療效果；

√?具備更強特異性、靶向性和降低脫靶毒性：利用雙特異性抗體兩個抗原結(jié)合臂可以結(jié)合不同抗原的特點，兩個抗原結(jié)合臂分別結(jié)合癌細胞表面2種抗原，可以有效增強抗體對癌細胞的結(jié)合特異性和靶向性，降低脫靶等副作用；

√?有效降低治療成本：以BiTE為例，與傳統(tǒng)抗體相比在組織滲透率、殺傷腫瘤細胞效率、脫靶率和臨床適應(yīng)癥等指標方面都具有較強的競爭力，臨床優(yōu)勢顯著。特別在使用劑量方面，由于其治療效果可以達到普通抗體的100-1000倍，使用劑量最低可將為原來的1/2000，顯著降低藥物治療成本。相對于組合療法，雙特異性抗體的成本也遠遠低于兩個單藥聯(lián)合治療。

雙特異性抗體的制備主要有雙雜交瘤細胞法，化學(xué)偶聯(lián)，重組基因制備等方法。重組DNA技術(shù)是目前制備BsAb使用最多的技術(shù)。

3、雙特異性抗體的制備方法

雙特異性抗體的制備主要有雙雜交瘤細胞法，化學(xué)偶聯(lián)，重組基因制備等方法。重組DNA技術(shù)是目前制備BsAb使用最多的技術(shù)。

√?化學(xué)偶聯(lián)法：該方法最早出現(xiàn)于上世紀80年代，其原理是通過化學(xué)偶聯(lián)劑（如鄰苯二馬來酰亞胺、N-琥珀酰-3-（2-吡啶二硫基）丙酸鹽、二硫代?；郊姿岬龋蓚€完整IgG或兩個F(ab)2抗體片段偶聯(lián)成一種BsAb，這種方法快速簡便，但是容易破壞抗原結(jié)合部位從而影響抗體活性，同時交聯(lián)劑本身的安全性和致癌性不確定；

√?雙雜交瘤融合法：通過細胞融合的方法將2株不同的雜交瘤細胞融合成雙雜交瘤細胞株，然后通過常規(guī)的雜交瘤篩選法克隆靶細胞。由于雙雜交瘤的遺傳背景來源于親代的兩種雜交瘤細胞，它必然要產(chǎn)生2種重鏈和2種輕鏈分子，而這些輕重鏈的隨機組合配對方式才能產(chǎn)生所需的BsAb.利用雙雜交瘤方法制備雙特異性抗體隨機性較大，效率低，但是BsAb生物活性較好，抗體結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定。利用Konck-in-hole技術(shù)可以有效解決異源抗體抗體重鏈正確配對的難題。制備方法是將一個抗體的重鏈CH3區(qū)366位體積較小的蘇氨酸突變?yōu)轶w積較大的絡(luò)氨酸，形成突出的“杵”型結(jié)構(gòu)；將另一個抗體重鏈CH3區(qū)407位較大的絡(luò)氨酸殘基突變成較小的蘇氨酸，形成凹陷的“臼”型結(jié)構(gòu)；利用“杵臼”結(jié)構(gòu)的空間位阻效應(yīng)實現(xiàn)兩種不同抗體重鏈間的正確裝配?；瘜W(xué)偶聯(lián)法和雙雜交瘤融合法生產(chǎn)出的雙特異性抗體為鼠源性，具有較強的免疫原性，且產(chǎn)量低純度差，在臨床應(yīng)用上有很大的制約；

√?基因工程：利用基因工程技術(shù)制備雙特異性抗體是目前最常用的制備方法，其制備原理為利用基因工程技術(shù)對傳統(tǒng)抗體進行基因工程方面的改造，從而形成多種形式的雙特性抗體。

4、雙特性抗體在腫瘤治療中的研發(fā)現(xiàn)狀

Catumaxomab

Catumaxomab（Removab，Trion）于2009年正式獲得EMA批準在歐洲上市，用于治療惡性腹水（腹腔轉(zhuǎn)移癌晚期患者常見的一種并發(fā)癥），成為全球第一個上市的雙特異性抗體。在II / III期研究中，腹膜內(nèi)catumaxomab改善了無穿刺存活率和下次腹腔穿刺的中位時間，減少了腹水的體征和癥狀，并顯示出改善OS的趨勢。 最常見的不良反應(yīng)是發(fā)熱，惡心，嘔吐和腹痛。目前正在進行的臨床試驗包括卵巢癌、胃癌和上皮癌。Catumaxomab是一個分子量在150kDa三功能的抗體，由一個靶向腫瘤EpCAM的小鼠IgG2a和一個靶向CD3ε的大鼠IgG2b構(gòu)成，同時還能通過Fcγ受體激活單核細胞、巨噬細胞、星狀細胞以及NK細胞。由于小鼠和大鼠的輕重鏈之間很少發(fā)生錯配，通過quadroma（hybrid-hybridoma）的方式，將分別表達小鼠和大鼠抗體的雜交瘤進行二次融合，從而得到同事分泌Triomab雙特異性抗體以及小鼠和大鼠單克隆抗體的雜交瘤細胞株。然后在通過親和力純化的方式、分別去除小鼠和大鼠單克隆抗體。雖然Catumaxomab是第一個批準上市的雙特異性抗體，但同時也具有非常明顯的局限性，主要體現(xiàn)在Triomab抗體復(fù)雜的生產(chǎn)工藝以及異源抗體比較容易產(chǎn)生的免疫原性問題。

Blinatumomab（博納吐單抗）

Blinatumomab于2014年12月4日獲得美國FDA批準，用于治療費氏染色體陰性的前體B細胞急性淋巴細胞白血病。Blinatumomab由Micromet公司（后被Amgen公司收購）開發(fā)，是利用DNA重組技術(shù)制備的一種雙特異性的單鏈抗體BiTE，通過一條多肽鏈把靶向腫瘤細胞和T細胞表面抗原的兩種單克隆抗體的可變區(qū)連接起來，Blinatumomab選擇性地靶向B細胞表面抗原CD19，同時特異性地結(jié)合T細胞表面抗原CD3從而激活T細胞。因為主要由兩條單鏈抗體連接而成，BiTE的分子量較?。?5-60kDa），容易滲透腫瘤組織。同時BiTE缺乏Fc段因而免疫源性較低。臨床試驗已經(jīng)證明Blinatumomab即便在很低的使用劑量下，依然可以有效召集T細胞并清除腫瘤，顯著改善復(fù)發(fā)或難治性B細胞前體ALL患者的中位OS。 其常見的不良反應(yīng)包括發(fā)熱，頭痛，發(fā)熱性中性粒細胞減少和外周性水腫。但是由于沒有Fc片段，BiTE抗體分子的體內(nèi)半衰期很短，試劑使用的時候需要額外配備連續(xù)輸液裝置。2017年Blinatumomab全球銷售達1.75億美元（2014年300萬美元、2015年0.77億美元、2016年1.15億美元）。

其他在研雙特異性抗體

目前有多個雙特異性抗體正在開展用于治療腫瘤的臨床試驗，其結(jié)構(gòu)中多包含CD3抗原結(jié)合位點（用于募集T細胞到腫瘤細胞附近），另一個結(jié)合位點包括CD19,CD20,CD33,CD123,HER2,CEA，神經(jīng)節(jié)苷脂GD2，PSMA，gpA33等等。另外，還有一些雙特異性抗體為：HER2 + HER3, IL1α+IL1β,IL13+IL17, IL17A/IL17F和CD30+CD16A。

部分終止臨床的雙特異性抗體：在進入臨床用于治療腫瘤的雙特異性抗體中，共有8個臨床試驗被終止。

5、國內(nèi)雙特異性抗體研發(fā)企業(yè)

據(jù)不完全統(tǒng)計，國內(nèi)目前從事雙特異性抗體研發(fā)的企業(yè)共有19家，其中上市公司3家，分別為珠海麗珠、江蘇恒瑞、浙江海正藥業(yè)，非上市公司16家，分別為武漢友芝友（石藥占股40%）、武漢中美華世通、蘇州康寧杰瑞、蘇州信達、蘇州天演藥業(yè)、蘇州博生吉（安科生物占股20%）、上海君實生物、上海復(fù)宏漢霖（復(fù)星醫(yī)藥子公司）、上海岸邁生物、上海健能?。ê戏蕛|帆子公司）、上海宜明昂科、北京康眾生物、北京天廣實、深圳本康生物、中山康方生物、杭州特瑞思。

武漢友芝友：友芝友是一家專門從事生物醫(yī)藥自主創(chuàng)新研發(fā)的高科技企業(yè)。從團隊上講，友芝友是一個由院士領(lǐng)銜，制藥巨頭研發(fā)高管參與的國際化背景團隊。CDE的數(shù)據(jù)顯示，友芝友自主開發(fā)的“注射用重組抗HER2和CD3人源化雙特異性抗體”(M802)和“注射用重組抗EpCAM和CD3人鼠嵌合雙特異性抗體”（M701），分別于2017年9月29日和2018年3月6日獲得臨床批件。

武漢中美華世通：中美華世通成立于2009年，由“國家千人計劃”專家張發(fā)明博士回國創(chuàng)立。其子公司杭州翰思生物致力于腫瘤免疫領(lǐng)域生物大分子的研發(fā)及產(chǎn)業(yè)化，自主研發(fā)的PD-1目前已在進入國內(nèi)二期臨床。臨床前品種圍繞PD-1布局多個雙特異性抗體，包括PD-1/CD47,PD-1/IL-10,PD-1/VEGF,CD47/VEGF等等，其中PD-1/CD47（HX009）目前已完成中試，正在猴子體內(nèi)進行長毒試驗，預(yù)計明年中獲得臨床批件。

蘇州康寧杰瑞：CRIB（Charge Repulsion Improved Bispecific）是康寧杰瑞自主研發(fā)的雙特異性抗體平臺，基于完整的抗體框架結(jié)構(gòu)，通過有針對性的調(diào)整不同F(xiàn)c鏈之間的電荷網(wǎng)絡(luò)分布，大大增加異二聚體形成的幾率的同時，阻礙同二聚體的形成，從而達到構(gòu)建雙特異性抗體分子的目的。目前康寧杰瑞的研發(fā)的“注射用重組人源化抗HER2雙特異性抗體”已于2018年4月10號獲得臨床批件，另外還有多個雙特異抗體處于臨床前研究。

蘇州信達生物：信達生物制藥致力于做國內(nèi)最好、國際一流的高端生物制藥公司。在雙特異性抗體領(lǐng)域，信達生物與岸邁生物、禮來達成合作協(xié)議，獲得岸邁生物的FIT-Ig平臺技術(shù)的全球權(quán)益，開發(fā)包括IBI302在內(nèi)的雙靶點單克隆抗體注射液。IBI302可用于治療多種眼底黃斑疾病和實體瘤，通過同時阻斷疾病發(fā)生和發(fā)展過程中的兩個靶點，達到標本兼治的效果，顯著優(yōu)于現(xiàn)有治療水平。

蘇州天演藥業(yè)：天演藥業(yè)成立于2012年，致力于開發(fā)新一代治療性和診斷用抗體技術(shù)的生物制藥公司。公司的藥物篩選平臺“動態(tài)高精度抗體技術(shù)”突破了生物抗體藥物研發(fā)面臨的兩大瓶頸：如何擴展治療性抗體的靶向空間和如何提高抗體藥物開發(fā)的成藥性。目前，天演藥業(yè)已經(jīng)建立了高質(zhì)量的、多樣性達千億的可開發(fā)性抗體庫，能精準地設(shè)計、構(gòu)建及篩選治療性抗體，并能生成針對不同靶點的單特異性與雙特異性抗體，包括傳統(tǒng)上難以生成抗體的復(fù)雜靶點的但特異性及雙特異型抗體產(chǎn)品線。

蘇州博生吉：博生吉醫(yī)藥以腫瘤細胞免疫治療技術(shù)與產(chǎn)品為主要發(fā)展目標、以臨床技術(shù)服務(wù)為主要業(yè)務(wù)的高科技企業(yè)。博生吉以細胞療法為主，但在雙特異性抗體方面也嶄露頭角，公司研發(fā)的針對多發(fā)性骨髓瘤的CD3/CD138 BiTE在細胞水平上展現(xiàn)了骨髓瘤細胞的殺傷作用。

上海君實生物：君實生物是一家以開發(fā)治療性抗體為主的研發(fā)型高科技公司，專注于創(chuàng)新單克隆抗體藥物和其他治療性蛋白藥物的研發(fā)與產(chǎn)業(yè)化，已搭建國內(nèi)一流創(chuàng)新人源化抗體藥物產(chǎn)品研究開發(fā)技術(shù)平臺。該平臺涵蓋分子抗體藥物篩選、高產(chǎn)穩(wěn)定CHO細胞株的構(gòu)建及治療性抗體分析檢測在內(nèi)的多個核心技術(shù)。公司旗下目前在研的雙特異型抗體候選藥物主要有兩款：創(chuàng)新性人源化JS005雙特異抗體注射液、創(chuàng)新型人源化JS003雙特異抗體注射劑。

上海復(fù)宏漢霖：復(fù)宏漢霖由復(fù)星醫(yī)藥與美國科學(xué)家團隊于2009年12月合資組建，公司主要致力于應(yīng)用前沿技術(shù)進行單克隆抗體生物類似藥、生物改良藥以及創(chuàng)新單抗的研發(fā)及產(chǎn)業(yè)化。目前，復(fù)宏漢霖有14個單抗藥物處于在研階段，其中雙特異性抗體藥物兩個（HLX31、HLX32）。

上海岸邁生物：岸邁生物成立于2016年，主要關(guān)注腫瘤領(lǐng)域的雙特異性抗體研發(fā)。岸邁生物的核心技術(shù)是雙特異性抗體研發(fā)平臺FIT-lg，F(xiàn)IT-Ig是一項新型的構(gòu)建雙特異性抗體的技術(shù)平臺，保留了單克隆抗體的主要基本結(jié)構(gòu)元素及生物學(xué)特性，同時可以結(jié)合及抑制兩種不同的致病因子(靶源)，并且該項技術(shù)已經(jīng)通過了對產(chǎn)品的可藥性和產(chǎn)業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)的驗證。目前公司正全力將現(xiàn)有產(chǎn)品向臨床推進，預(yù)計第一個產(chǎn)品將于2018年進入臨床試驗階段。

上海健能?。航∧苈♂t(yī)藥建立了免疫抗體技術(shù)平臺ITabTM（Immunotherapy Antibodies），啟動了一系列雙特異性抗體藥物的開發(fā)，用于多種實體瘤和血液腫瘤的免疫治療。利用該技術(shù)憑條設(shè)計合成的雙特異性抗體分子具有獨特的結(jié)構(gòu)特征，可在真核細胞中表達，易于大規(guī)模生產(chǎn)。

上海宜明昂科：宜明昂科生物醫(yī)藥技術(shù)（上海）有限公司創(chuàng)立于2015年6月， 致力于腫瘤的免疫治療產(chǎn)品的開發(fā)研究，在研產(chǎn)品包括針對免疫調(diào)節(jié)靶點的單克隆抗體、經(jīng)過武裝的靶點特異性NK細胞以及雙特性性抗體。公司針對CD47靶點的單抗已于2018年9月1日獲得NMPA臨床試驗研究受理。

北京康眾生物：康眾生物的腫瘤T細胞生物治療技術(shù)平臺，基于其獨創(chuàng)的羊駝納米抗體快速分離技術(shù)，用于重點研發(fā)納米抗體雙特異性抗體（nanoBiTE）。BiTE(Bispecific T-cell engager)技術(shù)是采用DNA重組技術(shù)將識別T細胞的CD3抗體與其它抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)通過連接肽連接形成單一的雙特異性抗體，這種抗體能夠介導(dǎo)T細胞和靶細胞之間形成溶細胞行免疫連接，有效殺傷腫瘤細胞。

北京天廣實：是一家處于臨床階段的生物制藥公司，具備國內(nèi)領(lǐng)先的單抗藥物研發(fā)和產(chǎn)業(yè)化技術(shù)能力并形成了完善的技術(shù)體系。根據(jù)CDE的數(shù)據(jù)顯示，公司的“注射用重組人源化雙功能單克隆抗體MBS301（HER2-D2/D4）”已于2018年8月27日獲得臨床批件。

深圳本康生物：成立于2015年，主要從事生物制藥和細胞治療創(chuàng)新工具和技術(shù)解決方案的開發(fā)。公司技術(shù)團隊中不乏出自安進、拜耳這些巨頭公司的研發(fā)人才，依托公司在蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域多年的研究經(jīng)驗，公司儲備了大量有望改造和提升細胞治療技術(shù)的工具，涵蓋雙特異性抗體藥物開發(fā)、細胞培養(yǎng)方案及基于磁珠的細胞分離技術(shù)以及細胞檢測等諸多方面。目前一共有5個雙特異性抗體藥物，其中有三個正在展開臨床試驗，除了一項是在美國申報以外，其他兩項試驗尚未公布申報地點。

中山康方生物：AK-104是中山康方生物醫(yī)藥開發(fā)的一種雙特異性抗體，同時靶向于CTLA-4和PD-1。CTLA-4和PD-1是在腫瘤浸潤淋巴T細胞上共表達的免疫檢查點蛋白，康方研發(fā)的AK104能同時阻斷這兩個通路。AK-104目前已在澳大利亞啟動了臨床一期試驗，用于治療晚期實體瘤。中山康方生物醫(yī)藥已于2017年11月向CFDA藥品審評中心遞交了該藥的新藥臨床試驗(IND)申請。

杭州特瑞思：特瑞思是由國家“千人計劃”專家吳幼玲博士領(lǐng)導(dǎo)的海外歸國精英聯(lián)合浙江民營企業(yè)家創(chuàng)立的，是一家集研發(fā)、中試放大和商業(yè)化生產(chǎn)、銷售為一體的創(chuàng)新生物制藥企業(yè)。公司擁有豐富的產(chǎn)品管線，其中2個雙特異性抗體處于臨床前研究，分別是TRS008（治療非小細胞肺癌、尿路上皮癌）、TRS009（治療肺癌、黑色素瘤、膀胱癌，消化道腫瘤）。TRS008是特瑞思于2018年4月與上海岸邁生物合作引進的品種，浙江特瑞思該藥的中國市場開發(fā)權(quán)益,岸邁生物將保留該項目除中國以外的全球商業(yè)權(quán)益。

6、結(jié)語

雙特異性抗體是抗體藥物領(lǐng)域最新的一個概念，被視為治療腫瘤的第二代抗體療法。國內(nèi)雖然有多家企業(yè)布局雙特抗體領(lǐng)域，但多處于臨床前研發(fā)狀態(tài)，進入臨床階段僅有武漢友芝友、蘇州康寧杰瑞、北京天廣實等幾家企業(yè)。作為一種前瞻技術(shù)，其在產(chǎn)業(yè)化面臨諸多挑戰(zhàn)，如解決錯配和純化，改善下游工藝不穩(wěn)定，保證雙抗的穩(wěn)定性和平衡兩個抗體的表達量等。隨著技術(shù)的進步，相信未來可以利用更多更好的策略來優(yōu)化各種雙特異性抗體，使其具有更強大的療效和更低的副作用，為腫瘤患者帶去福音。

7、參考文獻

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