菠菜葉綠體制備物-從含葉綠素樣品觀察顯微鏡

  植物葉片線粒體
  要從含葉綠素的膜上分離葉片線粒體實(shí)在是不太容易。單用差速
離心法獲得的制備物中所含蛋白質(zhì)與葉綠素的比例為15。這種制備
物可用相分配法加以純化。得到蛋白質(zhì)與葉綠素的比例為100。用
密度梯度離心也可達(dá)到同樣的純化程度，但線粒體制備物仍是綠色
。只有將三種方法：差速離心、密度梯度離心和相分配結(jié)合采用才
能得到不含葉綠素的制備物。

  通過(guò)逆流分配可將由差迷離心分離的葉綠體分成三個(gè)群體組成
。左峰(1)代表由外膜和葉綠體基質(zhì)包圍著的完整葉綠體；中峰(Ⅱ
)代表裸露的類囊體膜(系統(tǒng)Ⅱ葉綠體)；而右峰(剪)代表重疊細(xì)胞
器復(fù)合物，它由一個(gè)到多個(gè)完整葉綠體組成，周圍是包含有線粒體
和過(guò)氧化物小體的合膜細(xì)胞質(zhì)層。菠菜葉綠體制備物中重疊細(xì)胞器
復(fù)合物的量為總?cè)~綠素的0．5％到5％。子葉或幼嫩葉片的重疊細(xì)
胞器復(fù)合物得率較高，延長(zhǎng)勻漿時(shí)間會(huì)增加其得率。令有重疊細(xì)胞
器復(fù)合物的膜似乎與細(xì)胞質(zhì)膜是一樣的，它們與原生質(zhì)體或分離的
細(xì)胞質(zhì)膜有十分相似的分配特點(diǎn)。

  結(jié)合采用兩種不同的分離方法，即離心和相分配是行之有效的
。峰I和峰Ⅲ的顆粒大小差不多一樣，但因其表面性質(zhì)不同，通過(guò)
分配法可達(dá)到有效的分離。該結(jié)果還表明，CCD在發(fā)現(xiàn)新類型細(xì)胞
顆粒方面也是很有用的。在早期，用電鏡觀察常規(guī)葉綠體制備物時(shí)
，由于峰Ⅲ中重疊細(xì)胞器復(fù)合物的濃度很低，而未被發(fā)現(xiàn)。但在用
ccD所得的峰Ⅲ中，它們被選擇性地富集，幾乎達(dá)到100％的群體。
  由于葉綠體和其周圍的細(xì)胞層合作，重疊細(xì)胞器能合成蔗糖和氨
基酸。常規(guī)葉綠體制備物中混有重疊細(xì)胞器復(fù)合物，導(dǎo)致在葉綠體
新陳代謝和酶的位置．

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