免疫熒光熒光顯微鏡技術在細胞生物學領域的應用

  免疫熒光染色技術，它可能是目前應用熒光顯微鏡最多的技術
。熒光團標記抗體可作為敏感而特異的探針，來標記固定細胞和／
或通透性細胞內(nèi)的抗原，并能定位特定的蛋白質(zhì)。若用不同熒光團
標記兩個或更多抗體，并用它們來染細胞的話，則同時可見多種蛋
白質(zhì)的分布。本單元講述固定細胞與細胞染色的基本方法，以及發(fā)
現(xiàn)并解決潛在問題的技巧。

  隨著選擇性標記細胞內(nèi)細胞器的熒光染料的發(fā)現(xiàn)，熒光顯微鏡
又多了一個用途，即用來檢測活體內(nèi)特定細胞分子的空間分布。用
選擇性熒光探針標記三種細胞器(內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復合體與線粒體)
的方法，
  另一個較好的成像系統(tǒng)為共聚焦顯微鏡，它能收集標本內(nèi)薄聚
焦面上的光線而清晰成像。
  共聚焦顯微鏡在細胞生物學領域的應用；詳述如何實現(xiàn)共聚焦
光切片及如何重建標本的三維圖像；也談到了不同類型的共聚焦顯
微鏡系統(tǒng)(包括激光掃描、快速掃描及雙光子)及其優(yōu)缺點，并提供
一些建議，便于該儀器的使用。
  采用免疫過氧化酶法定位細胞內(nèi)抗原。采用這種方法，在光學
顯微鏡及電子顯微下均能檢測蛋白質(zhì)的分布，進而了解不同放大倍
數(shù)的細胞組織情況。本單元涉及一些關于確?？贵w進入抗原所在的
細胞內(nèi)位置、保持抗原特性以及在固定與染色過程中維持較好的細
胞形態(tài)的技巧。另外，也談到了免疫過氧化物酶染色的優(yōu)缺點以及
確保其成功的操作技巧。

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