熒光成像技術(shù)即熒光斑點(diǎn)顯微鏡術(shù)(FSM)的應(yīng)用

  一種熒光成像技術(shù)，即熒光斑點(diǎn)顯微鏡術(shù)(FSM)，該技術(shù)用于
觀察肌動(dòng)蛋白與微管蛋白等細(xì)胞內(nèi)蛋白復(fù)合物的動(dòng)力學(xué)、運(yùn)轉(zhuǎn)及更
新。該技術(shù)原理在于向大分子結(jié)構(gòu)內(nèi)注射入低濃度的熒光亞單位，
它與未被熒光標(biāo)記的內(nèi)源性亞單位共同裝備蛋白質(zhì)，這樣就可在分
辨率有限的熒光圖像中觀察到感興趣的結(jié)構(gòu)內(nèi)的熒光斑點(diǎn)排布。熒
光斑點(diǎn)排布的改變可用于定量分析結(jié)構(gòu)的組裝、拆解及運(yùn)動(dòng)。與傳
統(tǒng)的熒光成像技術(shù)相比，該技術(shù)大大減少了離焦熒光，所以熒光標(biāo)
記結(jié)構(gòu)的熒光斑點(diǎn)大大增強(qiáng)了。此外，與僅可檢測(cè)小范圍標(biāo)記部分
的光敏化和光漂白技術(shù)相比，F(xiàn)SM則可檢測(cè)整個(gè)細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)動(dòng)
力學(xué)。作為該技術(shù)有用性的例證，采用FSM技術(shù)研究活細(xì)胞內(nèi)微管
蛋白與肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的動(dòng)態(tài)變化的方法，并詳述了熒光標(biāo)記微
管蛋白與肌動(dòng)蛋白的方法及延時(shí)成像技術(shù)。
  近年來，以水母(Aequoria victoria)的綠色熒光蛋白作為探
針來研究活細(xì)胞甚至活體內(nèi)的特定蛋白質(zhì)的技術(shù)在逐步發(fā)展。綠色
熒光蛋白(GFP)及其基因變異體，并舉例說明如何用GFP來研究活細(xì)
胞內(nèi)特定的GFP融合蛋白的定位及遷移。
  光學(xué)顯微鏡的校準(zhǔn)及調(diào)節(jié)
  本單元講述經(jīng)典的研究型復(fù)合光學(xué)顯微鏡以透射及反射照明成
像模式工作時(shí)校準(zhǔn)與調(diào)節(jié)的方法，而這兩種成像模式是該顯微鏡在
生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的常用模式。透射光模式包括亮視場和相差，而
反射照明的主要模式為熒光顯微鏡術(shù)。

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