視頻光學倒置熒光顯微鏡-細胞器的超微結(jié)構(gòu)檢測

相關(guān)的視頻光學／電子顯微鏡術(shù)基本方案
  相關(guān)的視頻光學／電子顯微鏡術(shù)
  這種方法采用免疫金染色法和免疫過氧化物酶染色法來做電鏡
標本的染色
  通常免疫金染色法常用來標記絕大部分抗原；而免疫過氧化物
酶染色法通常僅用來標記那些位于膜包被的小間隔內(nèi)的抗原，這是
因為過氧化物酶反應生成的電子致密產(chǎn)物易從抗體結(jié)合處彌散開。
只有采用免疫金染色法才能標記位于胞質(zhì)內(nèi)的GFP融合蛋白質(zhì)的抗
原決定簇。此外，HRP(辣根過氧化物酶)標記也適用于其他的抗原
決定簇。
  值得一提的是，許多用免疫熒光顯示結(jié)果非常好的抗體在免疫
源性電鏡染色中不甚理想，因為在多數(shù)電鏡標本的固定過程中用到
的戊二醛很容易與抗原決定簇中的氨基酸基團橋聯(lián)到一起；然而，
若是減少或者不用戊二醛會造成細胞內(nèi)細胞器的超微結(jié)構(gòu)無法很好
保存。如果免疫源性電鏡標記行不通，可以采用一些調(diào)節(jié)手段 
將培養(yǎng)皿放于倒置熒光顯微鏡下，選擇一個轉(zhuǎn)染的目的細胞，確定
其在細胞定位柵
  格坐標上的相對位置，并在細胞定位柵格圖上繪出(照出)其位置
。
  用多光子顯微鏡、激光掃描共焦顯微鏡或者數(shù)碼熒光倒置顯微
鏡(通過計算機能獲得一系列時延性圖像)來觀察選擇的活細胞內(nèi)
GFP標記結(jié)構(gòu)的動態(tài)變化。
  在攝取圖像的過程中，如果有感興趣的圖像，則向細胞培養(yǎng)基
中加入固定劑A(細胞培養(yǎng)基／固定劑A一1：1)。
  停止攝取影像，細胞在固定劑A內(nèi)放置5～10min。如果需要，繼
續(xù)攝取一系列細胞影像。

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