微生物快速和自動(dòng)化檢測(cè)熒光圖像顯微鏡的技術(shù)

  隨著快速化和自動(dòng)化檢測(cè)領(lǐng)域的發(fā)展，儀器檢測(cè)和診斷測(cè)試開(kāi)
始逐步結(jié)合?，F(xiàn)在，儀器在提高診斷檢測(cè)的效率中發(fā)揮著越來(lái)越大
的作用，而且這種趨勢(shì)將持續(xù)。以下的討論主要集中在與微生物生
長(zhǎng)相關(guān)的儀器檢測(cè)信號(hào)上。
  儀器可以監(jiān)控諸如ATP含量、特殊酶的含量、pH、電阻抗、電
導(dǎo)率、電容，以及產(chǎn)熱性能、放射性、二氧化碳等指標(biāo)的變化。需
指出，要使所得信息有效，這些參數(shù)必須與同種樣品中的活細(xì)胞數(shù)
量相關(guān)聯(lián)。一般來(lái)說(shuō)，樣品中可檢測(cè)的活細(xì)胞數(shù)越多，檢測(cè)所用的
時(shí)間就越短。結(jié)果可以繪制成散點(diǎn)圖并用于對(duì)未知樣品的分析。這
種方法的依據(jù)是，當(dāng)樣品中微生物的數(shù)I增加時(shí)，這些物理的、生
物物理的、生化的指標(biāo)也將隨之增加。當(dāng)一個(gè)樣品中微生物濃度，
從加樣到得出結(jié)果可以在4h內(nèi)完成。
  所有活的生物體都利用ATP,,當(dāng)有螢火蟲(chóng)酶系統(tǒng)(熒光素酶和熒
光索系統(tǒng))、氧氣和鎂離子存在時(shí)，ATP可以促使反應(yīng)產(chǎn)生熒光。反
應(yīng)中產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度與樣品中ATP含量成正比關(guān)系。因而，熒光強(qiáng)
度可以用來(lái)估計(jì)樣品中的細(xì)胞生物量。在這個(gè)過(guò)程中產(chǎn)生的熒光能
夠用靈敏的、自動(dòng)化的熒光計(jì)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。一些儀器能夠檢測(cè)到的AT
P含量可以低至100一100°Fg。有報(bào)道曾指出，在一個(gè)菌落形成單
位中ATP的量為0.47fg，浮動(dòng)范圍在0.22一1.03電?；谶@個(gè)原理
，許多研究者用ATP含量來(lái)估算液態(tài)和固態(tài)食品中微生物細(xì)胞的數(shù)
量。
  最初，科學(xué)家嘗試用ATP含量來(lái)估算食品中活細(xì)胞的總量。但
結(jié)果可重復(fù)性差，這是由以下因素造成的:①不同的微生物每個(gè)細(xì)
胞中ATP的量不相同(例如酵母細(xì)胞中ATP的量是細(xì)菌細(xì)胞的100倍);
②即使是同一微生物，在不同的生長(zhǎng)階段，每個(gè)細(xì)胞中ATP的量也
是不相同的;③其他生物的ATP造成的背景干擾，如血液和食品中生
物流體的ATP可以對(duì)目標(biāo)細(xì)菌的ATP造成干擾。只有進(jìn)行大量的研究
和開(kāi)發(fā)，科學(xué)家才能區(qū)分微生物的ATP與非微生物的ATP，從而使基
于ATP含量所估算的活細(xì)胞數(shù)量更加準(zhǔn)確。由于在數(shù)分鐘內(nèi)便可測(cè)
出ATP含量，因此對(duì)這種方法的探索仍有潛力。迄今為止，基于ATP
含量的檢測(cè)方法還不能很好地應(yīng)用于食品中微生物活細(xì)胞總量的測(cè)
定。
  另一方面，在某些食品如酒中，無(wú)論何種來(lái)源的ATP都不可接
受。因此，監(jiān)控ATP的含量是酒類產(chǎn)品質(zhì)保的一種有效手段。

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