New Brunswick S41i CO2 恒溫搖床培養(yǎng)雜交瘤細胞及中國倉鼠卵巢 (CHO) 細胞 點擊次數(shù)：2339 發(fā)布日期：2019-2-11 來源：本站 僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負
環(huán)保、 低耗氣 New Brunswick S41i CO2 恒溫搖床培養(yǎng)雜交瘤細胞及中國倉鼠卵巢（CHO） 細胞
Nick Kohlstrom, George Wang, Linette Philip and Ma Sha, Eppendorf Inc., Enfield, CT, U.S.A. 在本研究中 New Brunswick S41i CO2 恒溫搖床培養(yǎng)哺乳動 物細胞的可行性首次通過培養(yǎng)中國倉鼠卵巢細胞（CHO） 得 到了驗證。 并將其與市售兩款主流 CO2 恒溫搖床的性能進行 比較。 使用 New Brunswick S41i 培養(yǎng)雜交瘤細胞在細胞生 長速率和活細胞率方面與其他同類產(chǎn)品相比性能同等， 同時 研究還比較 CO2 氣體的消耗量， 憑借高端的環(huán)保設(shè)計及先進 的參數(shù)控制， New Brunswick S41i CO2 恒溫搖床的氣體消 耗量與同類產(chǎn)品相比低于其 10 倍之多， 顯示出優(yōu)越的性能。
綜述
汽車不僅僅是 CO2 氣體排放的唯一來源， 實驗室設(shè)備， 例如 CO2 培養(yǎng)箱每年可以產(chǎn)生超過 2 萬升的 CO2。 Eppendorf 提出 環(huán)保倡議來減少其產(chǎn)品對環(huán)境造成的影響。 大多數(shù)培養(yǎng)箱消 耗的 CO2 被排放到大氣中， 而 Eppendorf 的新型恒溫搖床 New Brunswick S41i 在正常的細胞培養(yǎng)條件下釋放極少量的 CO2， 并且不影響搖床的性能。 本研究通過培養(yǎng)雜交瘤細胞及 中國倉鼠卵巢細胞（CHO） 評估了 New Brunswick S41i 恒溫 搖床的性能。 本研究還比較 New Brunswick S41i 恒溫搖床與 其他同類產(chǎn)品的 CO2 消耗量。 數(shù)據(jù)揭示 New Brunswick S41i 恒溫搖床的 CO2 消耗量與同類型產(chǎn)品相比低 5 倍到 10 倍之多， 其碳足跡亦低于同類產(chǎn)品 5 倍到 10 倍。
高端的設(shè)計減少氣體的泄漏， 緊固密封的玻璃內(nèi)門被外門所保 護， 牢固密封的驅(qū)動結(jié)構(gòu)使其與培養(yǎng)腔體隔離。 基于細胞培 養(yǎng)的生長速率、 細胞密度及活細胞率的比較 New Brunswick S41i 恒溫搖床的性能處于業(yè)界領(lǐng)先地位。
這一款新型 CO2 培養(yǎng)箱配置四個偏心驅(qū)動為懸浮細胞的生長提 供精確及穩(wěn)定的環(huán)境控制。 搖床驅(qū)動器經(jīng)優(yōu)化后， 可在潮濕和 二氧化碳富集的環(huán)境中保持高性能。
材料和方法
 
New Brunswick Galaxy 氣體分析儀
Omega FMA-1608A 熱質(zhì)量流量計（Omega 工程， 美國）
Eppendorf 耗材
- Research plus 單通道移液器
- epT.I.P.S
- Easypet
DG44 中國倉鼠卵巢細胞（英杰公司）
EX-CELL 化學(xué)成分明確的中國倉鼠卵巢細胞無血清培養(yǎng)基 （西格瑪公司）
雜交瘤細胞 DA4-4； 美國模式培養(yǎng)物保藏所： HB57
DMEM 培養(yǎng)基（美國模式培養(yǎng)物保藏所， ATCC）
5% 胎牛血清（Gibco 公司）
100x 青霉素（Gibco 公司）
中國倉鼠卵巢細胞（CHO） 培養(yǎng)方法
CHO 細胞在加入有 1% 抗生素 青霉素（EX-CELL ） 的中國 倉鼠卵巢細胞無血清培養(yǎng)基中生長。 6 個 250 mL 錐形瓶各以 60 mL 培養(yǎng)基接種 , 接種密度為 3 105 cells/mL。 且每個錐形 瓶從同一批培養(yǎng)基制備得來。 錐形瓶被放置在搖床板上六個不 同的位置， 結(jié)果均一化。 錐形瓶在 37 C， CO2 濃度為 5%， 空氣含量為 95%， 轉(zhuǎn)速為 130 RPM（4.69 rcf） 的條件下進 行培養(yǎng)。
CHO 細胞的生長周期為 14 天， 分別使用 YSI 2700 分析儀和 貝克曼庫爾特 Vi-CELL 分析儀在 3, 5,7,10, 12 和 14 天取樣分 析其葡萄糖含量、 細胞密度和活細胞率。
雜交瘤細胞培養(yǎng)方法
DA4-4 雜交瘤細胞在添加 5% 胎牛血清和 1% 抗生素 青霉 素的 DMEM 培養(yǎng)基中生長。 每個 250 mL 錐形瓶用 45 mL 培 養(yǎng)基接種， 所有錐形瓶中培養(yǎng)基為同一批制備得來， 分別放置 在 New Brunswick S41i CO2 恒溫搖床、 同類產(chǎn)品 1 和同類產(chǎn) 品 2 的六個不同位置。 錐形瓶在 37 C， CO2 濃度為 5%， 空 氣濃度為 95%， 轉(zhuǎn)速為 95 RPM（2.52 rcf） 的條件下進行培養(yǎng)。 雜交瘤細胞在培養(yǎng)第 2 天和第 4 天分別傳代接種細胞密度均為 2 105 cells/mL。 每個錐形瓶每日取樣， 分別使用 YSI 2700 分析儀和貝克曼庫爾特 Vi-CELL 分析儀分析其葡萄糖含量、 細 胞密度和細胞活性。
氣體消耗量
New Brunswick S41i CO2 恒溫搖床和同類產(chǎn)品 1、 同類產(chǎn)品 2 設(shè)置均為 37 C， 轉(zhuǎn)速 95 RPM， CO2 濃度 5%， 并確保該環(huán) 境已穩(wěn)定運行12小時。CO2進氣壓力設(shè)置在廠商建議的最低值。 使用離線 CO2 分析儀驗證每臺搖床中 CO2 的濃度。 使用熱質(zhì) 量流量計記錄每臺搖床在 48 小時后所消耗的氣體體積。 重復(fù) 試驗三次， 平均結(jié)果如右所示：
結(jié)果
1) CHO 細胞及雜交瘤細胞的生長評估 圖 1： New Brunswick S41i CO2 恒溫搖床中培養(yǎng) CHO 細胞的 平均活細胞密度和活細胞率
  CHO 活細胞的最大活細胞密度在第七天達到了 4.72 106 cells/mL。 細胞率于前五天維持在 98%， 隨后即緩慢下降 ( 如 圖 1 所示 )。
  圖 2： 在 New Brunswick S41i CO2 恒溫搖床、 同類產(chǎn)品 1 和 同類產(chǎn)品 2 中， 雜交瘤細胞平均活細胞密度的比較
  與 CHO 細胞相比， 雜交瘤細胞在第二天和第四天指數(shù)生長期 細胞進行傳代， 因此在前六天培養(yǎng)可維持 95% 的活細胞率。 最大活細胞密度在培養(yǎng)第六天達到 1.81 106 cells/mL（如圖 2 和圖 3 所示）
    圖 3： 在 New Brunswick S41i CO2 恒溫搖床、 同類產(chǎn)品 1 和 同類產(chǎn)品 2 中， 雜交瘤細胞平均活細胞率的比較
2） 氣體消耗量的測定
當(dāng) CO2 濃度設(shè)定在 5% 時， 對 CO2 消耗量的測定顯示在相同 時間內(nèi)， 其他同類產(chǎn)品比 New Brunswick S41i CO2 恒溫搖床 消耗更多的 CO2 氣體。 （如圖 4 所示） 圖 4： 24 小時內(nèi)每臺搖床平均 CO2 氣體消耗量（標(biāo)準(zhǔn)升） 討論和結(jié)論
在 New Brunswick S41i CO2 恒溫搖床研發(fā)過程中， 我們已考 量到客戶對環(huán)保型產(chǎn)品及追求產(chǎn)品更佳性能的需求日益高漲。 本研究通過培養(yǎng)兩種在研究和生產(chǎn)中常見的細胞株驗證了內(nèi)部 帶有 New Brunswick 搖床的新型 CO2 培養(yǎng)箱的性能。 該實驗 并未對培養(yǎng)過程和培養(yǎng)基進行優(yōu)化。
實驗結(jié)果顯示 New Brunswick S41i CO2 恒溫搖床能降低環(huán)境 影響至最小程度， 并有效培養(yǎng)哺乳動物細胞。 New Brunswick S41i CO2 恒溫搖床擁有四個偏心驅(qū)動， 為懸浮細胞的生長提供 精確及穩(wěn)定的環(huán)境。