血、尿中乙醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、異丙醇、

正丁醇、異戊醇的定性分析的定量分析方法（頂空氣相色譜法）

（GA/T105-1995）

1  頂空氣相色譜法

1.1  適用范圍：適用于低級(jí)醇類、醇性飲料中毒或中毒死亡者的血液和尿液中乙醇對(duì)血液、尿液樣品中進(jìn)行乙醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、異丙醇、正丁醇、異戊醇的定性分析及乙醇、甲醇、正丙醇的定量分析。

1.2 原理：本法利用醇類的易揮發(fā)性，以叔丁醇為內(nèi)標(biāo)，用頂空氣相色譜火焰離子化檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè),經(jīng)與平行操作的醇類標(biāo)準(zhǔn)品比較，以保留時(shí)間定性；用內(nèi)表法以醇類對(duì)內(nèi)標(biāo)物的峰面積比進(jìn)行定量。

1.3  器材與試劑

氣相色譜儀（配置火焰離子化檢測(cè)器）；樣品瓶（7ml青霉素瓶）

硅橡膠墊；聚四氟乙烯薄膜；鋁帽；密封鉗；注射器（1ml ）；

硫酸銨；甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液；叔丁醇

1.4  操作步驟 

1.4.1 色譜條件  氣相色譜儀

a） 色譜柱：（1）5%CARBOWAX20M Carbopack（80-120目）2mm 2m玻璃柱

  （2）Porapak  S（80~100目）2mm 2m玻璃柱

b） 柱溫： 柱（1）程序升溫：始溫70℃，速率5℃/min，終點(diǎn)170℃（5min）

  柱（2）程序升溫：始溫100℃，速率15℃/min，終點(diǎn)200℃（10min） 

c） 檢測(cè)器：火焰離子化檢測(cè)器（FID）

d） 檢測(cè)室溫：230℃

e） 汽化室溫：

210℃

f） 載氣（N2）：流速20-35ml/min

1.4.2 定性分析

1.4.2.1 樣品制備

  取待測(cè)全血（或尿液）1ml加入樣品瓶中，加100ul（2mg/ml）叔丁醇內(nèi)標(biāo)液，約1克硫酸銨，瓶口覆蓋氟乙烯薄膜，硅橡膠墊，用密封鉗加封鋁帽，混勻，置60℃水浴中加熱15 20min。

  同時(shí)取空白全血（或尿液）兩份，其中一份添加內(nèi)標(biāo)溶液100ul 和乙醇標(biāo)準(zhǔn)使用液20ul（20ug），按上述程序平行操作以進(jìn)行空白對(duì)照和已知對(duì)照分析。

1.4.2.2進(jìn)樣

  用1ml注射器分別吸取檢材、空白對(duì)照和已知對(duì)照瓶?jī)?nèi)液面上的氣體約0.5ml，注入氣相色譜儀中，每個(gè)試樣進(jìn)樣2~3次，并注入醇類標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.4.2.3記錄與計(jì)算

  分別記錄各試樣中內(nèi)標(biāo)物，醇類標(biāo)準(zhǔn)品和可疑醇峰的保留時(shí)間，填入GC定性分析結(jié)果中，計(jì)算它們的保留時(shí)間平均值，并以內(nèi)標(biāo)物的保留時(shí)間為1，計(jì)算醇的相對(duì)保留時(shí)間值。

1.5  定量分析

1.5.1樣品制備

精密吸取待測(cè)全血（或尿液）0.5ml兩份，分別加入樣品瓶?jī)?nèi)，加100ul（2mg/ml）叔丁醇內(nèi)標(biāo)液，按1.5.2.1密封瓶口后，混勻，置60℃水浴中加熱15 20min。

另取空白全血（或尿液）兩份，根據(jù)檢材中醇含量的多少，添加乙醇（或甲醇、正丙醇）標(biāo)準(zhǔn)使用液20ug 2mg，內(nèi)標(biāo)液100ul（200ug）按上述方法平行操作。

1.5.2檢測(cè)  氣相色譜儀

按1.5項(xiàng)中所述操作進(jìn)行。

1.5.3記錄與計(jì)算

1.5.3.1記錄檢材及空白添加標(biāo)準(zhǔn)品中乙醇（或甲醇、正丙醇）及內(nèi)標(biāo)物峰面積值，填入GC定量分析記錄表中，并算出各檢材乙醇（或甲醇、正丙醇）及內(nèi)標(biāo)物的平均峰面積值。

1.5.3.2計(jì)算相對(duì)校對(duì)因子

1.5.3.3計(jì)算檢材中醇含量W（mg/100ml）

1.5.3.4計(jì)算相對(duì)相差

式中：W1，W2為兩份檢材平行定量測(cè)定的結(jié)果，W為兩份檢材平均值。

1.6  結(jié)果評(píng)價(jià)

1.6.1定性結(jié)果評(píng)價(jià)

1.6.1.1本法血、尿中乙醇、甲醇的zui低檢出限為1ug/ml。正丙醇的zui低檢出限為10 ug/ml。如果添加于空白檢材中20ug乙醇出現(xiàn)相應(yīng)的色譜峰，而檢材未出現(xiàn)相應(yīng)的醇類色譜峰，可以認(rèn)為檢材中不含醇類，陰性結(jié)果可靠。如果添加于空白檢材中20ug乙醇未出現(xiàn)相應(yīng)的色譜峰，而檢材未出現(xiàn)醇類色譜峰，屬操作有誤，陰性結(jié)果不可靠，應(yīng)重新檢驗(yàn)。

1.6.1.2如果空白檢材未見(jiàn)出醇類色譜峰，而檢材有醇類色譜峰時(shí)。說(shuō)明空白無(wú)干擾，陽(yáng)性結(jié)果可靠，經(jīng)不同的色譜條件，結(jié)果一致時(shí)一般可以認(rèn)定檢材中含有某種醇類物質(zhì)。必要時(shí)，用GC/MS確證。

1.6.2定量分析結(jié)果評(píng)價(jià)

兩份檢材的相對(duì)差若不超過(guò)15%時(shí)，結(jié)果按兩份檢材含量的平均值計(jì)算，相對(duì)相差若超過(guò)15%，需重新進(jìn)行測(cè)定。

血、尿中乙醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、異丙醇、

正丁醇、異戊醇的定性分析的定量分析方法（頂空氣相色譜法）

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