Exocell Albuwell M說明書

Exocell是一家生命科學公司，為糖尿病及其并發(fā)癥管理相關(guān)的研究和開發(fā)提供市場領(lǐng)先的產(chǎn)品和服務。

Exocell是開發(fā)，營銷和執(zhí)行新型臨床和研究診斷分析的全球領(lǐng)先者，可幫助客戶進行基礎科學研究以及關(guān)于糖尿病及相關(guān)腎臟和血管疾病診斷和治療的實驗動物和臨床研究。

Exocell Albuwell M說明書

Exocell mAlbumin

m Albumin

Manufacturer/Trade:

Exocell / Albuwell M

Catalogue Numbers:

1011 Strip Plate

Methodology:

Competitive ELISA

Summary of procedure:

Albuwell M是一種直接競爭ELISA(抗體捕獲)，目的是通過測定尿白蛋白來監(jiān)測小鼠腎功能。完成測定、樣品及抗小鼠白蛋白抗體-hrp c的測定。 在白蛋白涂層井中加入共軛劑。抗體結(jié)合物與涂覆在平板上的白蛋白或與流體相的白蛋白發(fā)生反應，因此形成競爭結(jié)合的概念。

經(jīng)過30分鐘的孵化后，板被洗去反應物在流體相中。只有與平板上的白蛋白結(jié)合在一起的共軛物才能被發(fā)現(xiàn)，而且它是用TMB在顯色劑中檢測到的。 IC反應顏色強度與流體中白蛋白濃度的對數(shù)成反比。檢測可能在不到一個小時內(nèi)完成。

所需樣本

Urine, 10ul

分析范圍：

0.156-10 ug/mL

度

在測定的有效范圍內(nèi)的樣品的測定和分析間的精密度為平均值的 10%。。

Albuwell M

分析流程圖

稀釋標準和樣品

加入抗小鼠白蛋白抗體-HRP孵育30分鐘。

制水板

加入TMB顯色劑孵育5-10分鐘加入酸性色塞

在450 nm處測量吸光度完成計算

Albuwell M：小鼠微量白蛋白尿ELISA。

用途：Albuwell M是一種酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，用于測定小鼠尿液中白蛋白的含量。

技術(shù)背景：Albuwell M是一種評估小鼠腎功能的體外工具.該方法操作簡單，對小鼠白蛋白具有較高的特異性。這是一種競爭性的抗體捕獲酶聯(lián)免疫吸附試驗。 在一個直接的模式下被擦傷。為此，抗白蛋白抗體與辣根過氧化物酶(抗辣根白蛋白抗體-HRP)結(jié)合，即直接標記。

為完成檢測，在小鼠白蛋白包被良好的基礎上加入樣品和抗小鼠白蛋白抗體-HRP?？贵w與固定在固定相上的白蛋白或THA相互作用和結(jié)合。 在流體階段，因此競爭約束的概念。洗滌可將未結(jié)合的Ab-HRP-白蛋白和流體相中的其他反應物從井中去除.只有結(jié)合了t的抗體結(jié)合物 在顯色反應中，用四甲基聯(lián)苯胺(TMB)檢測固定相的白蛋白。反應用酸停止，在450 nm處測定吸光度。 吸光度與流體中白蛋白濃度的對數(shù)成反比。

標本收集和儲存：不加防腐劑的樣品收集，必要時用離心法澄清。在4℃保存1周或在-60℃保存2個月。公共關(guān)系 IOR測定，允許樣品達到室溫。不要用熱解凍冷凍樣品。

工具包內(nèi)容：您的Albuwell M工具包應包含下列項目：

2個Albuwell M測試板

2 NHEBSA(稀釋劑)

小鼠血清白蛋白(MSA)標準

2抗小鼠白蛋白抗體-HRP結(jié)合物

2色顯色劑

2色塞

操作指南

MSA標準，NHEBSA和抗小鼠白蛋白抗體-HRP結(jié)合制劑含有0.05%的Proclin300(活性成分異噻唑酮)作為防腐劑.色塞含稀釋(2.0 N)硫酸a cash in drawer 現(xiàn)金支付

阿爾布韋爾M板是預涂和準備使用。所有的試劑盒試劑都準備好使用液體。結(jié)果表明，自來水洗板工藝在實驗和實際操作中具有較好的適用性。 Ality控制上下文。然而，如果沒有自來水或證明不合適，我們建議使用含有0.15 M NaCl成分的EIA洗滌緩沖液，

0.01M三乙醇胺(pH6.8)、0.05%吐溫20和0.05%Proclin 300(新配制的緩沖液可省略防腐劑)。

能夠輸送10，50，100，

需要120和200 ul。推薦可輸送50和100 ul的多通道吸管。此外，還需要小試管才能完成稀釋(微管在 (本申請)。后，需要一個微板閱讀器來測定450 nm處的吸光度。

化驗程序：允許試劑和樣品在進行檢測前到達室溫。

標準稀釋：本程序描述了標準七(7)倍稀釋劑的制備.

每管制備8根微管，每管含200 l的NHEBSA。

管的標簽分別為 C 和1-7。

將MSA標準的200 ul傳輸?shù)?管。

將液體吸出并排出5次，將其混合。

將200 ul溶液從1管轉(zhuǎn)移到2管。

和以前一樣混在一起。

通過7管繼續(xù)這一過程。

1-7管的稀釋度分別為10.0、5.0、2.5、1.25、0.625、0.313和0.156 g/mL。

尿液樣品稀釋液的制備：準確測定尿白蛋白取決于適當?shù)臉悠废♂尪?。在大多?shù)情況下，1：13稀釋就足夠了，但是收集方法和動物知識。 dney功能(或功能障礙)可能導致異常高或極低的濃度。對于初步研究，明智的做法是在三種濃度下完成分析，即1：20。 和1點80分。所獲得的結(jié)果將允許選擇宜(單一)稀釋后的分析。

下面的示例說明了1：13稀釋協(xié)議。

為每個樣品準備并貼上一根微絨毛管。

在每管中加入120 ul NHEBSA

用干燥新鮮的針尖將10 l的樣品轉(zhuǎn)移到合適的管子上，用反復吸入和排出的方法沖洗出針尖。

把管子旋渦一下。

對其余的樣本繼續(xù)這一過程。

每個樣品現(xiàn)在稀釋1：13在NHEBSA。

添加對照、標準MSA稀釋物和樣品到板上：用不可磨滅的標記(1-12)標記條帶。這將允許重建板，如果在瓦邦期間脫落的條帶。 城建程序。稀釋后的標準和樣品可直接添加到干板上。

這個平板設計包括兩個對照：一個稱為C0的陰性對照和一個稱為C1的正對照。這些分別放置在A1和A2井中。所有其他井都有稀釋井。 ARD或稀釋樣品。測定量為50 l。

從管C到A1井加入100 ul的NHEBSA。這是負控制的 C0 ，并將用于規(guī)范或 空白 的微型平板閱讀器。

從C管到A2井加50 l的NHEBSA。這是陽性對照 C1 ，并作為一個定性指標的分析性能。

用一個新鮮的針尖，在標準稀釋數(shù)7中預濕頂部，并將50 l的流失量轉(zhuǎn)移到h1和h2井。

用同樣的針尖，在標準稀釋數(shù)6中預濕/沖洗針尖，并將50 l的液體轉(zhuǎn)移到G1和G2井。

繼續(xù)以這種方式將稀釋后的標準品轉(zhuǎn)移到盤子上，即預先潤濕/沖洗針尖，然后依次轉(zhuǎn)移標準的異形物。

使用一種新的針尖，在次稀釋樣品中預濕針尖，并將50 l的液體轉(zhuǎn)移到A3和A4井。

注意更換針尖，每次都要預濕，繼續(xù)往盤子里加入稀釋的樣品。

該平板現(xiàn)在包含控制和稀釋標準，在井A-H，1，2，和稀釋的實驗樣品一式兩份，在板的平衡。

初步孵育：與抗小鼠白蛋白抗體-HRP結(jié)合物的反應

在WellsA2-A12和B-H1-12上加入50 l的抗小鼠白蛋白抗體-HRP結(jié)合物.

蓋上盤子，孵育30分鐘。

洗盤：使用洗碗機或用手洗盤子，如下所示：

從井中取出液體，即吸出液體或倒入水槽。

用清水或沖洗緩沖液將井注滿。

像以前一樣去除液體。

2 和 3 構(gòu)成一個清洗周期。

重復這個過程，總共產(chǎn)生10個清洗周期。

將盤子倒置在紙巾上，輕輕拍打，去除多余的液體。

色彩發(fā)展：

添加100 ul顏色開發(fā)人員到每個井。

5-10分鐘

每口井加100 l的彩色塞子。

分析：檢查盤子。在A1井中的負控制井C0應該有很少或沒有顏色，而在A2井中的正控制井C1應該是強烈的顏色。 在盤子里。其余的井應該表現(xiàn)出在這兩個極端之間的潛逃。

這種分析假設計算機和分析軟件，例如MS Excel是可用的。

使用平板閱讀器在450 nm處測定吸光度，用A1中的C0井 空白 閱讀器。

準備一份電子表格，輸入適當?shù)臄?shù)據(jù)，包括標準稀釋度、濃度、樣品稀釋度和吸光度數(shù)據(jù)。確定復制井的平均值。

用x軸上的對數(shù)[MSA]和y軸上的平均吸光度，準備一幅標準稀釋度的半對數(shù)圖。這是劑量-反應或標準曲線。

屬于劑量-反應曲線線性部分的數(shù)據(jù)構(gòu)成了試驗的可用部分。

將這些數(shù)據(jù)進行半對數(shù)分析，得到一個形式的數(shù)學模型。

log10[MSA]=mA 450 b

MSA濃度是通過從這個方程中提取計算值的反對數(shù)來確定的。

乘以13(或反稀釋因子)校正稀釋。

質(zhì)量控制：

記錄保存：很好的實驗室實踐是記錄試劑盒組件和試劑的批號和日期。

樣品處理：如上文所述，樣品應被保護、處理和存儲。老鼠的尿液經(jīng)常被食物和糞便物質(zhì)污染，這些污染物具有潛在的來源。 錯誤。建議進行離心澄清樣品。

稀釋標準和樣品仔細。對于這些標準，可以使用一個單一的來準備稀釋序列。對于實驗樣本，每個尿液樣本都應使用新鮮的。

限制，邊界:

樣品不得含有HRP抑制劑，即Sodium azide。這些都會影響結(jié)果

研究人員有責任確定尿液中是否存在實驗化合物或其代謝物會影響檢測結(jié)果。

嚴重的微生物污染可能影響檢測結(jié)果。

血尿樣本即使經(jīng)離心澄清，也不適合使用，因為血液流動是污染的跡象，而且血液中的白蛋白濃度約為2 000蒂姆。 通常在尿液中發(fā)現(xiàn)的。精液中含有大量的白蛋白，也是潛在的污染源。

解決問題：

添加顏色開發(fā)人員后不會出現(xiàn)顏色：一個或多個試劑可能受到8 oC以上存儲的不利影響?？赡軟]有添加一個或多個試劑。重復試驗。一定要儲存t 他的裝備很合適。

水井中的顏色太輕：可能需要與顏色顯影劑進行更長時間的孵化。如果顯影10分鐘后顏色仍然太淺，重復檢測，但增加初級孵育 1 小時，鐘頭.

井中顏色太暗：縮短開發(fā)時間。如果5分鐘的發(fā)育仍然太暗，重復檢測，并將二次孵化減少到15分鐘。

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