本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷

人抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（CCP-Ab）ELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（CCP-Ab）捕獲抗原的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（CCP-Ab）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

酶標(biāo)儀（450nm）高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒溫箱

操作注意事項(xiàng)

 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。 預(yù)處理后的樣本無需稀釋，直接取10 L加樣即可。 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。 所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

12孔 8條

12孔 4條

無

標(biāo)準(zhǔn)品

0.3mL

0.3mL

無

樣本稀釋液

6mL

3mL

無

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

無

20 洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進(jìn)行稀釋

底物A

6mL

3mL

無

底物B

6mL

3mL

無

終止液

6mL

3mL

無

封板膜

2張

2張

無

說明書

1份

1份

無

自封袋

1個(gè)

1個(gè)

無

注：標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：120、60、30、15、7.5、0 U/mL.

試劑的準(zhǔn)備

 20 洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20 洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350 L，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟

 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50 L； 待測樣本孔先加待測樣本10 L，再加樣本稀釋液40 L； 隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100 L，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。 每孔加入底物A、B各50 L，37℃避光孵育15min。 每孔加入終止液50 L，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

結(jié)果判斷

 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

 

試劑盒性能

 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。 靈敏度：低檢測濃度小于0.1 U/mL。 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10%、板間變異系數(shù)小于15%。 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。 有效期：6個(gè)月

免責(zé)聲明

 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。 嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。

 

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