鴨瘟病毒核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）
（我司同時(shí)有登革熱，克錐蟲，絲蟲，非洲錐蟲，恙蟲，無形體，立次克體，基孔肯熱，寨卡病毒，黃熱病檢測(cè)試劑盒，各種質(zhì)控品，抗原，） 【詳細(xì)說明】

           鴨瘟病毒核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）

（我司同時(shí)有登革熱，克錐蟲，絲蟲，非洲錐蟲，恙蟲，無形體，立次克體，基孔肯熱，寨卡病毒，黃熱病檢測(cè)試劑盒，各種質(zhì)控品，抗原，）

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：鴨瘟病毒核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）

英文名稱：Detection Kit for Avian Influenza Virus Subtype H5 RNA (PCR-Fluorescence Probing)

【包裝規(guī)格】大包裝，24 反應(yīng)/盒；大包裝，48 反應(yīng)/盒

需自備的試劑：核酸提取試劑

質(zhì)控品說明：陽性質(zhì)控品為含目的片段的重組質(zhì)粒，使用時(shí)無需進(jìn)行核酸提取。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

試劑盒保存于-20 5℃，有效期 9 個(gè)月。

試劑盒在 37℃可保存72h；試劑在 4℃可保存7天；避免反復(fù)凍融，反復(fù)凍融次數(shù)不超過 7 次；試劑開瓶次數(shù)不超過 7 次。運(yùn)輸采用干冰保持低溫，運(yùn)輸時(shí)間不應(yīng)超過 3 天。試劑盒生產(chǎn)日期見產(chǎn)品標(biāo)簽。

【適用儀器】ABI 7500、ABI 7300、LightCycler480 等熒光定量 PCR 儀。

【樣本要求】

新城疫病毒核酸檢測(cè)試劑盒

適用樣本類型：咽喉拭子、泄殖腔拭子、肌肉或臟器樣本等。樣品采集與前處理（注意無菌操作）活禽樣品 取咽喉拭子和泄殖腔拭子，或新鮮糞便拭子，具體采集方法如下： 咽喉拭子，采取時(shí)要將拭子深入喉頭及上腭裂來回刮3～5次，取咽喉分泌液； 取泄殖腔拭子時(shí)，將拭子深入泄殖腔轉(zhuǎn)一圈沾取糞便；對(duì)于易造成損傷的小珍禽，直接用拭子沾取適量新鮮糞便； 將咽喉拭子和泄殖腔拭子一起放入盛有1.0ml PBS的Eppendoff管中，編號(hào)備用。內(nèi)臟或肌肉樣品 用無菌鑷剪夾取待檢樣品2.0g于研缽中充分研磨，再加10mlPBS混勻，或置于組織勻漿器中，加入10mlPBS勻漿，然后將組織懸液轉(zhuǎn)入無菌Eppendoff管中3,000 rpm離心10 min，取上清液轉(zhuǎn)入Eppendoff管中，編號(hào)備用。

3. 保存與運(yùn)送

請(qǐng)遵循目前的流感標(biāo)本采集方案以及標(biāo)準(zhǔn)的流感標(biāo)本儲(chǔ)存、包裝和運(yùn)送標(biāo)準(zhǔn)和相應(yīng)的國際航空運(yùn)輸協(xié)會(huì)的規(guī)定。

【檢驗(yàn)方法】

1.樣本處理和核酸提?。颖咎幚韰^(qū)）

建議取 200 l 液態(tài)樣本進(jìn)行核酸提??；組織樣本可以研磨液進(jìn)行提取操作?？刹捎猛ㄓ玫暮怂崽崛≡噭┖校?qǐng)按照試劑盒說明書進(jìn)行操作；也可選擇其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品。

本試劑盒中的陰性質(zhì)控品參與提取，用于對(duì)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控；AIV H5 陽性質(zhì)控品不參與提取，用于 PCR 檢測(cè)試劑的質(zhì)控。

3.3 LightCycler480 儀器設(shè)置

點(diǎn)擊軟件主界面的 New Experiment ,進(jìn)入程序設(shè)定界面。

 檢測(cè)模式設(shè)置：從 Detection Format 的下拉框中選擇分析模式：Multi Color Hydrolysis Probe, Customizes 模塊中選擇 483-533 濾片組合， Block Type 為儀器自動(dòng)檢測(cè)， Plate ID 可手工輸入或掃描儀掃描， Reaction Volume 設(shè)定為 25ul。

循環(huán)參數(shù)：定義 PCR 程序中每個(gè)步驟（Program Name）及循環(huán)數(shù)(Cycles)和分析模式(Analysis Mode),利用 + 和 - 增加或刪除步驟，擴(kuò)增參數(shù)如下

50℃ 15 分鐘，1 個(gè)循環(huán)；

95℃ 15 分鐘，1 個(gè)循環(huán)；

94℃ 15 秒* 58℃ 45 秒，40 個(gè)循環(huán)；（此步采集熒光信號(hào)： Analysis Mode 選擇 Quantification , Acquisition Mode 選擇 Single ）

40℃ 10 秒，1 個(gè)循環(huán)；

填樣品表：點(diǎn)擊 SampleEditor 模塊，進(jìn)入樣本信息編輯界面，在 SelectWorkflow 中選擇 AbsQuant ,在 SampleName

列中定義樣本名稱,在 Sample Type 欄中選定樣品類型：陰性質(zhì)控品選 NTC；未知樣品選 Unknown。

運(yùn)行程序：點(diǎn)擊 Experiment 模塊，回到程序設(shè)定界面，點(diǎn)擊窗口右下方的 StartRun ,彈出結(jié)果保存窗口，輸入文件名和路徑后進(jìn)入程序運(yùn)行界面。

4. 結(jié)果分析

4.1 反應(yīng)結(jié)束后保存檢測(cè)數(shù)據(jù)文件。

4.2 分析條件設(shè)置：根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) baseline 的 start 值、stop 值以及 Threshold 的 Value 值（用戶可根據(jù)實(shí)際情況自行調(diào)整， Start 值可以在 3～15、End 值可設(shè)在 5～20，調(diào)整陰性對(duì)照的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線），點(diǎn)擊 Analysis 自動(dòng)獲得分析結(jié)果，在 Report 界面察看結(jié)果。

4.質(zhì)量控制

陰性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線無對(duì)數(shù)增長期；陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯對(duì)數(shù)增長期，且 Ct 值 32；

以上要求需在同一次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)滿足，否則，本次實(shí)驗(yàn)無效，需重新進(jìn)行。

5.結(jié)果判定

1. 如果檢測(cè)樣品的擴(kuò)增曲線無對(duì)數(shù)增長期或 Ct 值＞38，可判樣品為禽流感 H5 亞型陰性；

2. 如果檢測(cè)樣品 Ct 值 38，且曲線有明顯的對(duì)數(shù)增長期，可判樣品為禽流感 H5 亞型陽性。

【檢測(cè)方法的局限性】

樣本檢測(cè)結(jié)果和樣本收集、處理、運(yùn)送及保存質(zhì)量有關(guān)，其中任何失誤都將會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果。如果樣本處理時(shí)沒有控制好交叉污染，可能出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

根據(jù)產(chǎn)品分析性能評(píng)估結(jié)果，本試劑盒的靈敏度為 1.0 103copies/ml。與感染部位相同或感染癥狀相似的其他病原體（副流感病毒、新城疫病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒等）無交叉反應(yīng)。

【注意事項(xiàng)】

1.本產(chǎn)品僅用于體外診斷；

2.實(shí)驗(yàn)室管理應(yīng)嚴(yán)格按照 PCR 基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范，實(shí)驗(yàn)人員必須進(jìn)行專業(yè)培訓(xùn)，實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格分區(qū)   進(jìn)行（試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)），所用消耗品應(yīng)滅菌后一次性使用，實(shí)驗(yàn)操作的每個(gè)   階段使用專用的儀器和設(shè)備，各區(qū)各階段用品不能交叉使用；

3.為試劑和標(biāo)本準(zhǔn)備階段提供生物安全柜，實(shí)驗(yàn)過程中穿工作服，帶一次性手套，使用自卸管移液器；

4.試劑使用前要完全解凍，8,000rpm 離心數(shù)秒后使用；

5.標(biāo)本制備區(qū)所用過的吸頭請(qǐng)打入盛有消毒劑的容器，并與廢棄物一起滅菌后方可丟棄；

6.實(shí)驗(yàn)完畢用 10%次氯酸或 75%酒精處理工作臺(tái)和移液器,然后用紫外線燈照射 20－30 分鐘；

7.本試劑盒內(nèi)陽性質(zhì)控品應(yīng)視為具有傳染性物質(zhì)，操作和處理均需符合相關(guān)法規(guī)要求：衛(wèi)生部《微生物生物

醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》和《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》。                                     

新城疫病毒/禽流感病毒核酸檢測(cè)試劑盒

廣州創(chuàng)侖禽流感病毒通用型核酸檢測(cè)試劑盒                                            禽流感病毒H9亞型核酸檢測(cè)試劑盒

                         

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