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豬胃腸炎流行腹瀉輪狀TGEVPEDVPRV-A熒光PCR根據(jù)豬傳染性胃腸炎/豬流行性腹瀉病毒/豬A組輪狀病毒設(shè)計(jì)特異性引物和探針，用熒光 PCR 技術(shù)對(duì)核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。本試劑盒適用于檢測(cè)分泌物、血液、脾臟、扁桃體、腎臟和淋巴結(jié)等樣本中的TGEV/PEDV/PRV-A。
豬胃腸炎流行腹瀉輪狀TGEVPEDVPRV-A熒光PCR說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：豬傳染性胃腸炎/豬流行性腹瀉病毒/豬A組輪狀病毒(TGEV/PEDV/PRV-A)???核酸檢測(cè)試劑盒(實(shí)時(shí)熒光-PCR法)
Name ：Porcine transmissible gastroenteritis / porcine epidemic diarrhea virus / swine group A rotavirus (TGEV/PEDV/PRV-A) nucleic acid detection kit (real-time fluorescence -PCR)?
【包裝規(guī)格】48T/盒
【預(yù)期用途】
豬傳染性胃腸炎/豬流行性腹瀉病毒/豬A組輪狀病毒(TGEV/PEDV/PRV-A)???感染引起的豬急性、熱性、高度接觸性傳染病。其特征為高熱，網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)出血，死亡率高。家養(yǎng)豬和野豬都可以被感染，而且不分品種和年齡。
本試劑盒適用于檢測(cè)分泌物、血液、脾臟、扁桃體、腎臟和淋巴結(jié)等樣本中的豬傳染性胃腸炎/豬流行性腹瀉病毒/豬A組輪狀病毒(TGEV/PEDV/PRV-A)???，用于豬傳染性胃腸炎/豬流行性腹瀉病毒/豬A組輪狀病毒(TGEV/PEDV/PRV-A)???感染的輔助診斷。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒根據(jù)豬傳染性胃腸炎/豬流行性腹瀉病毒/豬A組輪狀病毒(TGEV/PEDV/PRV-A)???基因組設(shè)計(jì)特異性引物和探針，用熒光 PCR 技術(shù)對(duì)核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。
【試劑組成】
名 稱 規(guī) 格
核酸提取液 1.5mL 2 管
酶液 50 L 1 管
反應(yīng)液 1.0mL 1 管
陽(yáng)性質(zhì)控品 50 L 1 管
陰性質(zhì)控品 250 L 1 管
注：
1）不同批號(hào)試劑不能混用。
2）試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標(biāo)示的檢測(cè)次數(shù)。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
-20℃ 5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于 7 次，有效期 12 個(gè)月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。
【標(biāo)本采集】
病死或撲殺豬，取分泌物、血液、脾臟、扁桃體、腎臟和淋巴結(jié)等
【保存和運(yùn)輸】
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過(guò) 6 個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。
【使用方法】
1.樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1樣本前處理
組織樣品：每份組織分別從 3 個(gè)不同的位置稱取樣品約 1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取
0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100 L 于 1.5mL 滅菌離心管中；全血樣本：待血凝固后，取血清 100 L 于 1.5mL 滅菌離心管中。
1.2DNA 提取
1)對(duì)上述處理好的標(biāo)本加入 50 L 核酸提取液，100℃恒溫處理 10min，13,000
rpm 離心 5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；
2)DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 DNA 提取試劑盒
（離心柱提取法），請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。
2.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 ASFV 反應(yīng)液 酶液
用量（樣本數(shù)為 N） 20 L 1 L
將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，21uL/管。
3.加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟 1 提取的 DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4 L，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4.PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
4.1將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；
4.2設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25 L；
熒光通道選擇： 檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）
NONE，ABI 系列儀器請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。
5.2結(jié)果判斷
陽(yáng)性：檢測(cè)通道 Ct 值 35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線。
可疑：檢測(cè)通道 Ct 值 35.0，且出現(xiàn)明顯擴(kuò)增曲線的樣本建議重復(fù)試驗(yàn)，重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn) Ct 值 35.0 和明顯擴(kuò)增曲線者為陽(yáng)性，否則為陰性。
陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果無(wú) Ct 值且無(wú)明顯的擴(kuò)增曲線。
【參考文獻(xiàn)】
[1]國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局. SN/T 1559-2010 非洲豬瘟檢疫技術(shù)規(guī)范[S].
[2]黃萍, 肖家勇, 歐陽(yáng)振宇. 非洲豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測(cè)方法的建立[S]. 中國(guó)動(dòng)物檢疫, 2010.
[3]董志珍, 侯艷梅, 趙祥平. 非洲豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測(cè)方法的建立[S]. 中國(guó)獸醫(yī)雜志, 2009.
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0432甲型流感病毒N3亞型(IAV-N3)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-P48T 0422甲型流感病毒N2亞型(IAV-N2)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-P48T 0402禽流感病毒N9亞型(AIV-N9)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PC48T 0362禽流感病毒H9亞型(AIV-H9)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PC48T 0342禽流感病毒H7亞型(AIV-H7)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PC48T 0322禽流感病毒H5亞型(AIV-H5)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PC48T 0312禽流感病毒通用型(AIV-U)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法48T 0212乙型流感病毒(IBV)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法)48T 0162甲型流感病毒H1-2009(IAV-H1-2009)核酸檢測(cè)48T以上信息由企業(yè)自行提供，信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé)，91化工儀器網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
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