原理：帽狀類似物：GTP經(jīng)優(yōu)化設(shè)計為1:4，zui大化轉(zhuǎn)錄生成RNA和帽狀RNA所占比例。20ul的反應體系加入1 g DNA模板在2h內(nèi)可以體外合成15-35 g 7-甲基鳥苷帽狀RNA，其產(chǎn)量是傳統(tǒng)體外轉(zhuǎn)錄反應的10-50倍。優(yōu)勢：1）一步法直接合成帶帽狀結(jié)構(gòu)的RNA，其結(jié)構(gòu)與大多數(shù)真核生物體內(nèi)的mRNA結(jié)構(gòu)相同；2）試劑盒內(nèi)酶混合液含RNase抑制劑，保護RNA不被降解；3）試劑盒含對照模板（Xenopus elongation factor 1a, pTRI Xef），以檢測試劑盒的轉(zhuǎn)錄效率；應用：帽狀RNA可直接用于下游實驗：顯微注射入卵母細胞，體外翻譯，轉(zhuǎn)染或者其他。試劑盒成分：（25 reactions）1.75 ml， Nuclease-free Water。50 L Enzyme Mix （SP6, T7, or T3），50%甘油緩沖液含RNA聚合酶、Rnase抑制劑和其他。50 L，10X Reaction Buffer （SP6, T7, or T3） ，含鹽類、緩沖液、DTT和其他成分。250 L，2X NTP/CAP （SP6, T7, or T3），一種中性緩沖液含有ATP/CTP/UTP/GTP/帽狀類似物。100 L GTP，20 mM in SP6 Kits; 30 mM in T3 and T7 Kits。100 L，TURBO DNase （2 U/ L）。10 L，pTRI-Xef, 0.5 mg/mL （Control Template）。1 ml，Ammonium Acetate Stop Solution。1.4 mL，Lithium Chloride Precipitation Solution。1.4 mL，Gel Loading Buffer II。實驗材料（自行準備）：DNA模板：待轉(zhuǎn)錄的DNA序列上游必須帶有正確的RNA聚合酶啟動位點（T7，T3或SP6）；標記核苷酸（選擇性）：[ -32P] UTP or [ -32P]CTP可加入反應體系用作追蹤元素，方便定量檢測RNA合成量；合成RNA純化試劑（選擇性）：緩沖液或飽和酚/氯仿，異丙醇，離心柱；DNA模板（注意事項）：（1）試劑盒選擇：根據(jù)帶轉(zhuǎn)錄的DNA序列上游帶有的RNA聚合酶啟動位點（T7，T3或SP6）選擇對應的試劑盒；（2）模板濃度：推薦使用0.5 g/ L水溶液或TE溶液；（3）模板大?。簔ui佳長度是0.3-5.0kb，可用于更長或更短的模板，需適當調(diào)整反應條件；（4）模板方向：若合成sense RNA（正義RNA），使用RNA聚合酶對應的細菌啟動子在5端或者蛋白質(zhì)編碼區(qū)的N末端；如果模板含有質(zhì)粒，經(jīng)多克隆位點內(nèi)切酶線性化后啟動子處于相反位置；若合成antisense RNA（反義RNA），使用RNA聚合酶對應的細菌啟動子在3或者蛋白質(zhì)編碼區(qū)的C末端；產(chǎn)品信息：現(xiàn)貨供應！

貨號 名稱 產(chǎn)地 規(guī)格 報價 特價/元 庫存 AM1340 mMESSAGE mMACHINE SP6 Kit Invitrogen 25T 6210 5279 是 AM1344 mMESSAGE mMACHINE T7 Kit Invitrogen 25T 6210 5279 3~4周 AM1348 mMESSAGE mMACHINE T3 Kit Invitrogen 25T 6210 5279 3~4周

參考文獻：Aziz RB and Soreq H （1990） Improving poor in vitro transcription from GC-rich genes. Nucl. Acids Res. 18:3418.Browning KS （1989） Transcription and translation of mRNA from polymerase chain reaction-generated DNA.Amplifications 3: 14 15.Krieg PA and Melton DA （1987） In vitro RNA synthesis with SP6 RNA polymerase. Meth. Enzymol. 155:397 415.Krieg PA （1990） Improved Synthesis of Full-Length RNA Probes at Reduced Incubation Temperatures. Nucl. Acids Res. 18: 6463.Milligan JF, Groebe DR, Witherell GW, and Uhlenbeck OC （1987） Oligoribonucleotide synthesis using T7 RNA polymerase and synthetic DNA template. Nucl. Acids Res. 15: 8783 8798.Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd edition. （1989） editor C Nolan, Cold Spring Harbor Laboratory Press.Mullis KB, and Faloona F （1987） Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase catalyzed chain reaction. Meth. Enzymol. 155: 335 350.Schenborn ET and Mierindorf RC （1985） A novel transcription property of SP6 and T7 RNA polymerases: dependence on template structure. Nucl. Acids Res. 13: 6223 6236.Stoflet ES, Koeberl DD, Sarkar G, and Sommer SS （1988） Genomic amplification with transcript sequencing. Science 239: 491 494.